|
Продувание воздуха с углекислотой через среду (П. В. Павлов, Е. И. Нехотенова, 1957), насыщение воздуха термальных комнат озоном (В. П. Рябчикова, 1959), встряхивание культуры (А. Д. Боярйкая, 1949; Н. А. Крепышева, 1959), увеличение показателя поверхностно-объемных отношений в бульоне (U. Mueller, 1939; А. Бейлинсон, В. Геккер, 1943; В. Н. Шаровская, Р. Г. Мухутдинова, 1959; Ю. А. Хавкин с соавт., 1964) способствуют увеличению токсинообразования.
Более сильные дифтерийные токсины можно получить при глубинном культивировании дифтерийной культуры (Ю. А. Хавкин с соавт., 1965; Е. А. Ильницкая с соавт., 1965 и др.). Однако обезвреживание таких токсинов при добавлении формалина происходит более медленно (Ю. А. Хавкин с соавт., 1965; А. Н. Лобанова с соавт., 1973).
Л. Б. Балаян (1959) показала возможность использования для гипериммунизации лошадей антигена, приготовленного реакторным методом.
В результате усовершенствования изготовления питательных сред качество токсина-анатоксина повышалось. Интересны данные, которые приводит Г. Рамон (1962) в отношении совершенствования производства анатоксина (таблица из книги Г. Рамона «Сорок лет исследовательской работы», 1962).
Таблица 14 Антигенные свойства анатоксина из токсинов, полученных на различных средах
Токсин, полученный на средах |
Антигенные свойства анатоксина, выраженные в единицах флокуляции |
Ферментированный обессахаренный бульон Мартена (1898—1927) |
8-10 |
Ферментированный бульон Мартена с глюкозой (1928) |
12-15 |
Неферментированная среда с глюкозой (1929) |
15-20 |
То же с глюкозой и уксуснокислым натрием
(1932) |
25-30 |
То же с дрожжами (1934) |
40 |
То же с дрожжами и мальтозой (1937) |
40-60 |
В качестве антигена для гипериммунизации широко применяется анатоксин. Последний получается при детоксикации дифтерийного токсина 0,4% формалина при температуре 40° в течение 30 дней.
Для консервирования его используют фенол 0,25—0,3%. Однако Е. А. Ильницкая (1959) указывает, что последний травмирует антигенные и иммуногенные свойства анатоксина, в связи с чем она предлагает применять для этой цели мертиолят 1:10000.
Используется анатоксин, проверенный на безвредность, иммуногенность и антигенность.
Методика проверки безвредности, установленная еще G. Ramon (1925), заключается в подкожном введении по 5 мл анатоксина морским свинкам в Оба бока и наблюдении за ними не менее месяца, чтобы не пропустить поздних проявлений интоксикации, последние отмечались Н. И. Антоновым и С. П. Карповым (1937).
Иммуногенность проверяется на морских свинках, получивших по 5 мл анатоксина. Препарат иммуногенен, если на 30—40-й день после иммунизации предохраняет морских свинок от 30 Dim токсина.
М. В. Далин С соавт. (1969) использовали для проверки иммуногенности хомяков.
Для определения антигенных свойств анатоксина применяют реакцию флокуляции, предложенную G. Ramon (1924). Однако, по данным Н. Г. Фиш и М. В. Далина (1969), оценка антигенной активности дифтерийного анатоксина по единицам связывания дает более точные сведения об антигене, чем реакция флокуляции, хотя между ними и существует параллелизм (Л. А. Левченко, 1947). Реакция флокуляции анатоксина не всегда отражает его иммуногенные свойства (М. П. Изболинский, 1926; 1929; В. А. Крестовникова, А. И. Гороховникова, 1929; R. Prigge, W. Kolle, 1934; Е. Н. Левкович, О. С. Зан, 1936; Э. Ю. Ген, А. О. Фельдштейн, 1937; L. Greenberg, М. Robben, 1948; К. Т. Халяпи- на, 1954; С. В. Чеботарева, 1958; В. И. Изместьева, А. Д. Гаделева, 1965 и др.). Сравнение же антигенных по интенсивности антитоксинообразования и иммуногенных свойств анатоксинов, полученных на среде триптического переваривания с энтерокиназой и среде триптического переваривания Вагнер-Сахаровой, показало их равнозначность несмотря на различную по флокуляции активность (П. В. Павлов, А. Г. Леонова, 1961). Аналогичные данные приводит Н. Г. Фиш (1969), показавший коррелятивную зависимость между антитоксинсвязывающей активностью и иммуногенностью. И. Ф. Валдохина (1965) считает, что оценку качества анатоксина лучше проводить не по титру в Lf, а по иммуногенным свойствам путем однократной иммунизации морских свинок малыми дозами анатоксина с последующим определением его активности по LD50.
В настоящее время для оценки качества анатоксина учитывается комплекс свойств антигена.
Благодаря безвредности анатоксина животные хорошо переносят большие дозы его, мало изнашиваются, что дает возможность длительно эксплуатировать их (К. Халяпина, Ф. Баутц, 1925—1926).
Для гипериммунизации лошадей помимо анатоксина отдельные исследователи применяли смешанный антиген. Так, М. Ф. Видинский (1959) наблюдал хорошее антителообразование при использовании для иммунизации смеси равных частей токсина с анатоксином. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|