Исследования в области особоопасных инфекций

Получение высокоактивных токсинов для производства ботулинических антигенов

Как указывает Т. И, Булатова с соавт. (1970), при сравнительном культивировании штамма F 470 на бульонах казеиново-грибном, казеиново-кислотном, а также из кислотного гидролизата рыбо-костной муки сила токсина на последнем бульоне была наибольшей — 80—100 тыс. Dlm/мл.

Таким образом, из большого числа питательных сред, применяемых для производства ботулинических антигенов, наибольшее распространение получили для культивирования типов А и В бульон Глузмана, типов Е и F — бульон Мартена, типа С — кислотно-казеиновая среда с кукурузным экстрактом, для типа Д — бульон Вейнберга.

Для получения высокоактивных токсинов большое значение имеют условия культивирования, как-то: температура, процент посевного материала, длительность культивирования и т. д.

Многими авторами (К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, 1948; А. А. Воробьев, Н. Н. Васильев, А. Т. Кравченко, 1965; Л. Г. Щипкова, 1973; В. И. Чернявский, 1973) отмечается в первые 2—3 дня быстрое размножение Cl. botulinum. В этот период токсина в среде мало, на 3—4-е сутки наступает постепенная задержка размножения, а затем на 5—6-е сутки происходит лизис бактерий, культура начинает просветляться. В этот период быстро повышается в среде количество токсина. A. Prevot, Е. Brygoo (1953) отмечают, что ботулинические токсины типов А и В в процессе роста быстро диффундируют в окружающую среду через клеточную оболочку, токсины типов С и Д более долгое время задерживаются в клетке. Ток син типа Е занимает промежуточное положение: он не задерживается в бактериальной клетке и не очень быстро появляется в среде. Это в какой-то мере определяет длительность культивирования микробов.

Cl. botulinum типов А, В, С культивируют при 34—35° в течение 5—7 суток (С. А. Зелевинская, 3. М. Волкова, 1935;. Г. А. Королева К. И. Матвеев, 3. М. Волкова, 1958; К, И Матвеев, Т. И. Булатова, 1959; А. П. Маркин, Е. П. Лукин, Е. К. Петрова, А. А. Воробьев, 1961 и др.), типа Е — при температуре 28° в течение 7—11 суток (А. А. Воробьев, Н. Н. Васильев, Л. М. Самородов, И. В. Воронцов, Г. Т. Патрикеев, М. М. Макаренко, 1962; Е. Райчева и Н Марчев, 1966; Н. Марчев, 1967; Ю. А. Шаронов, Р. А. Афанасьева, 1968; В. И. Чернявский, 1973; С. А. Соловьева, 1973 и др.). По Е. Д. Кушнир (1941, 1952), наиболее подходящей температурой для выращивания Cl. botulinum типа Е является 22—25°. Г. А. Королева, К. И. Матвеев, 3. М. Волкова (1958) культивировали тип Е при 26°.

Культивирование Cl. botulinum типа F И. М. Михайлова и В. К. Гольшмид (1966) проводили при 28° 7 суток. Накопление токсина связано с pH среды. 3. М. Волкова и А. К. Данкеровиц (1935) показали, что pH при культивировании ботулимических бацилл падает в первые сутки с 7,8 до 6,6 и держится на этом уровне до 9-го дня, а затем начинает повышаться. Авторы полагают, что наименьшее pH в процессе роста возбудителей ботулизма является показателем максимума токсинообразования. По наблюдениям 3. Ф. Зубовой (1950), по мере роста бацилл типа А и В исходный pH питательной среды к 3—5-м суткам снижался и возрастал к 8—9-м. Максимум токсинообразования наблюдался в большинстве случаев на 7-й день. Культивирование Cl. botulinum типа F также приводит к снижению величины pH с 7,8 до 7,1 (В. П. Царапкин, 1972). Е. Д. Кушнир (1952) указывает, что для токсинообразования С1. botulinum типа Е лучше применять среды, имеющие pH 7,4—7,8. При pH 6,5 и 6,8 токсинообразование заметно снижается, а при pH 6,0 прекращается. Добавление к питательной среде углекислого кальция способствует стабилизации pH. Аналогичные результаты приводят С. Г. Атаманова и Е. Н. Воробьева (1969). Изучение динамики pH, проведенное С. А. Соловьевой (1973), показало, что при культивировании штамма Cl. botulinum типа Е 341 на бульоне Мартена наблюдается резкое подкисление среды на 3-и сутки. Дальнейшее снижение реакции среды менее значительно и продолжается до 11 суток, что соответствует максимуму токсинообразования. Затем pH стабилизируется и остается на одном уровне до 15 суток (период наблюдения).

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202