|
Рефрактерные животные и грундиммунизация
Титр сыворотки в реакции нейтрализации на белых мышах должен быть не ниже 1:500 при 100 ЛДБО. Интервалы между циклами определяются в зависимости от состояния лошади и в среднем колеблются от 14 до 20 дней. Если после 4-го цикла титр антител не достигает требуемого уровня, животное выбраковывают. Лошади-продуценты с высокими титрами антител (выше 1:500) после 6, 7 циклов иммунизации могут подвергаться только однократной ревакцинации путем подкожного введения 150 мл 10%-ной мозговой суспензии фиксированного вируса бешенства.
Из литературных данных хорошо известно, что не все животные, подвергнутые иммунизации, становятся полноценными продуцентами. Данное положение в равной степени распространяется и на животных-продуцентов антирабической сыворотки (P. Lepine, P. Atanasiu, 1967). Оно было подтверждено и в Томском институте вакцин и сывороток. Так, из 152 лошадей, поступивших за период с 1963 по 1967 год под антирабическую иммунизацию, было получено 75 продуцентов, или всего 49,3%. Остальные 77 лошадей оказались рефрактерными. Указанное положение послужило предпосылкой для Л. А. Стрельниковой (1970) применить грундиммунизацию. Наблюдения, выполненные на 39 лошадях 2 групп за 2—4 месяца до начала их цикловой эксплуатации позволила обеспечить выход от 95 до 100% продуцентов по сравнению с 46,1% в контрольной группе, не получавших предварительное грундирование, и значительно повысить специфическую активность сыворотки.
Первые наблюдения по получению очищенной антирабической сыворотки были проведены в 1945 г. К. Habel, который извлекал глобулины из иммунных сывороток кроликов: высаливанием их сернокислым аммонием с последующим водным диализом и методом пептического переваривания. Н. Koprowski с соавт. (1950) применили способ извлечения гамма-глобулина спиртовым методом. P. Devi с соавт. (1956) сравнили 4 метода очистки и концентрации, связанные с различным фракционированием сульфатом аммония и пришли к выводу, что наибольшей перспективностью обладает метод, основанный на 4-дневном диализе плазмы из целлофановых мешочков в холодную воду с последующим осаждением содержимого в изоэлектрической точке. Осадок разводится в двойном объеме дистиллированной водой, добавляется 0,2% крезола и 12 часов выдерживается на холоде. Надосадочная жидкость после центрифугирования нейтрализуется 20%-ной содой (pH 7,2) и добавляется равный объем сульфата аммония. Через час полученный осадок отжимается и диализируется. После чего изотоническим раствором NaCl pH доводится до 7,3 и проводится фильтрование через бумажную пульпу и фильтр Зейтца.
Первые исследования по изучению способов очистки и концентрации антирабической сыворотки были предприняты в 1955 г. М. А. Селимовым ссоавт. (1957), которые показали, что для фракционирования могут быть с одинаковым успехом использованы как метод фракционного осаждения сернокислым аммонием, так и метод спиртового осаждения на холоду. Последний обеспечивал получение более стандартного однородного препарата. Пептический перевар оказался непригодным. Позже метод спиртового осаждения на холоду с одинаковым успехом был использован рядом исследователей. При этом концентрация антител происходила в 3,7 раза (Н. И. Волавич, Е. Г. Гордиенко, Ф. М. Кац, М. А. Курилова, А. С. Хайкина, 1958; 1960), а в некоторых случаях и в 6—10 раз (Ф. Л. Миниович, 1962; В. И. Файн, М. Г. Каштанова, 1972). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|