Исследования в области особоопасных инфекций

Метод риванол-спиртового осаждения антирабической сыворотки

В 1963 г. Т. Л. Губенко для концентрации антирабической сыворотки применила метод риванол-спиртового осаждения и получила гамма-глобулин, по своей специфической активности в 16 раз превышающий исходную сыворотку.

В условиях Томского института вакцин и сывороток (Н. Г. Турлянцева, 1968) проведены наблюдения по сравнительному изучению наиболее эффективного метода фракционирования белков антирабической сыворотки. С этой целью автор выбрала: спиртовый (осаждения на холоду), модифицированный риваноловый и риванол-спиртовый методы. Первый был разработан в 1960 г. Н. Б. Плаховой, В. Г. Механиковой и А. И. Деевой применительно к сыворотке против клещевого энцефалита и получил название — вариант Томского НИИВС, найдя широкое применение при получении ряда антивирусных сывороток. При этом методе в отличие от варианта Б на второй стадии процесса фракционирования экстракцию гамма-глобулина производят при добавлении 3 объемов физиологического раствора вместо 1 и 6,5 объема дистиллированной воды вместо 4,5.

Наибольшей эффективностью обладает риванол-спиртовый способ как по выходу активного препарата, так и по степени концентрации антител. Вместе с тем препарат, полученный риванол-спиртовым методом, был электрофоретически однороден и содержал только гамма-глобулиновую фракцию, в то время как препарат, изготовленный модифицированным риваноловым методом, содержал 60,6% гамма- и 39,4% — Т-фракций иммунного глобулина, а методом спиртового осаждения — 63,7% гамма- и 36,3% — Т-фракций.

Эти данные позволили автору внести соответствующие дополнения в технологический регламент по получению препарата антирабического гамма-глобулина риванол-спиртовым методом.

С целью выбора лучшего технологического варианта фракционирования антирабической сыворотки было проведено (В. И. Файн и М. Г. Каштанова, 1972) сравнительное изучение 2 методов спиртового фракционирования: по варианту Б (51 серия) и варианту Томского НИИВС (46 серий). Как оказалась, специфическая активность и концентрация антител оказалась одинаковой при обоих методах, но выход 10%-ного раствора гамма-глобулина с 1 л сыворотки был выше по варианту Томского НИИВС (примерно на 35%), что значительно повышает рентабельность производства данного вида препарата.

Эти данные позволили авторам также внести вариан Томского НИИВС как дополнение в технологический регламент на производство антирабического гамма-глобулина.

Предпринимались попытки (Б. Сансызбаев, 1967) очищать и концентрировать антирабическую сыворотку по методу неполного протеолиза. Белки антирабической сыворотки содержащие гамма-глобулиновую фракцию, извлекали путей высаливания сернокислым аммонием при 33%-ном насыщении, бета-глобулин выделяли из центрифугата при 48%-нои насыщении этой же солью. Осадки белков промывали растворами сернокислого аммония соответствующих концентраций, центрифугировали и растворяли в воде (13 исходном объема сыворотки). Нативную сыворотку и выделенные из нее фракции, разведенные до содержания белка не боле 3%, ферментировали при 23° в течение 1 часа при pH 3,3 и 1 часа при pH 4,2 и добавляли пепсин в соответствии с его активностью по 14,4 г на каждый литр разведенной сыворотки или фракции, предварительно выделенной из антирабической сыворотки. После ферментации материал подвергали очистке методом Диаферм-3.

Готовый антирабический гамма-глобулин не должен со держать следов альбумина и должен в реакции нейтрализации на белых мышах обладать специфической активностью способной при разведении 1:2000 нейтрализовать от 20 до 1000 LD50 вируса.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202