Метод риванол-спиртового осаждения антирабической сыворотки
В 1963 г. Т. Л. Губенко для концентрации антирабической сыворотки применила метод риванол-спиртового осаждения и получила гамма-глобулин, по своей специфической активности в 16 раз превышающий исходную сыворотку.
В условиях Томского института вакцин и сывороток (Н. Г. Турлянцева, 1968) проведены наблюдения по сравнительному изучению наиболее эффективного метода фракционирования белков антирабической сыворотки. С этой целью автор выбрала: спиртовый (осаждения на холоду), модифицированный риваноловый и риванол-спиртовый методы. Первый был разработан в 1960 г. Н. Б. Плаховой, В. Г. Механиковой и А. И. Деевой применительно к сыворотке против клещевого энцефалита и получил название — вариант Томского НИИВС, найдя широкое применение при получении ряда антивирусных сывороток. При этом методе в отличие от варианта Б на второй стадии процесса фракционирования экстракцию гамма-глобулина производят при добавлении 3 объемов физиологического раствора вместо 1 и 6,5 объема дистиллированной воды вместо 4,5.
Наибольшей эффективностью обладает риванол-спиртовый способ как по выходу активного препарата, так и по степени концентрации антител. Вместе с тем препарат, полученный риванол-спиртовым методом, был электрофоретически однороден и содержал только гамма-глобулиновую фракцию, в то время как препарат, изготовленный модифицированным риваноловым методом, содержал 60,6% гамма- и 39,4% — Т-фракций иммунного глобулина, а методом спиртового осаждения — 63,7% гамма- и 36,3% — Т-фракций.
Эти данные позволили автору внести соответствующие дополнения в технологический регламент по получению препарата антирабического гамма-глобулина риванол-спиртовым методом.
С целью выбора лучшего технологического варианта фракционирования антирабической сыворотки было проведено (В. И. Файн и М. Г. Каштанова, 1972) сравнительное изучение 2 методов спиртового фракционирования: по варианту Б (51 серия) и варианту Томского НИИВС (46 серий). Как оказалась, специфическая активность и концентрация антител оказалась одинаковой при обоих методах, но выход 10%-ного раствора гамма-глобулина с 1 л сыворотки был выше по варианту Томского НИИВС (примерно на 35%), что значительно повышает рентабельность производства данного вида препарата.
Эти данные позволили авторам также внести вариан Томского НИИВС как дополнение в технологический регламент на производство антирабического гамма-глобулина.
Предпринимались попытки (Б. Сансызбаев, 1967) очищать и концентрировать антирабическую сыворотку по методу неполного протеолиза. Белки антирабической сыворотки содержащие гамма-глобулиновую фракцию, извлекали путей высаливания сернокислым аммонием при 33%-ном насыщении, бета-глобулин выделяли из центрифугата при 48%-нои насыщении этой же солью. Осадки белков промывали растворами сернокислого аммония соответствующих концентраций, центрифугировали и растворяли в воде (13 исходном объема сыворотки). Нативную сыворотку и выделенные из нее фракции, разведенные до содержания белка не боле 3%, ферментировали при 23° в течение 1 часа при pH 3,3 и 1 часа при pH 4,2 и добавляли пепсин в соответствии с его активностью по 14,4 г на каждый литр разведенной сыворотки или фракции, предварительно выделенной из антирабической сыворотки. После ферментации материал подвергали очистке методом Диаферм-3.
Готовый антирабический гамма-глобулин не должен со держать следов альбумина и должен в реакции нейтрализации на белых мышах обладать специфической активностью способной при разведении 1:2000 нейтрализовать от 20 до 1000 LD50 вируса. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|