|
Токсигенность и антигенность штаммов столбнячной палочки
Токсигенность и аитигенность штаммов столбнячной палочки можно усилить.
Т. А. Лобова (1935) получала положительный эффект при пассировании штамма через тестикулы кролика, Е. О. Бурное (1940) — через организм белых мышей. А. Ю. Иллютович и Ф. Т. Панин (1957), А. Ю. Иллютович (1962) предложили метод усиления антигенных и им муногенных свойств штаммов столбнячной палочки пассированием их 3—4 раза через организм кролика. Повысить активность штамма можно, пассируя его через прогретые куриные яйца (А. Ю. Иллютович, Н. И. Астахова, 1962; А. Ю. Иллютович с соавт., 1968).
С целью приготовления столбнячных антигенов используются различные мясные, казеиновые среды и их сочетания. Широкое распространение при культивировании Cl. tetani получила мясная среда R. Legroux и G. Ramon (1933). Использование этой среды, вошедшей в практику производства под названием бульона Рамона, и различных ее модификаций давало возможность получать высокоактивные столбнячные токсины (С. П. Заева, 1937; Л. А. Черная и К. Г. Дреслер, 1939; Д. И. Захарина, 1944; В. Н. Цып и А. И. Углева 1955 и др.), но затруднения, связанные с получением свежих свиных желудков, которые требуются для приготовления пептона, являющегося одним из компонентов этой среды, побудили исследователей к изысканию путей ее упрощения.
С.А. Зелевинекая с соавт., К. И. Матвеев (1960) отказались от добавления, эритроцитов, уменьшили процент глюкозы до 0,5%, для создания анаэробных условий в бутылях применили вату, несколько изменили методику приготовления пентона, ведя перевар фарша из свиных желудков при 50° (среда ЦИЭМ). На качество среды ЦИЭМ оказывает влияние глубина расщепления при переваре. При высоком коэффициенте расщепления (0,5—0,53) получаются слабые токсины (50000 DLM/мл), тогда как при меньшем расщеплении белка (коэффициент 0,2—0,3) и содержании аминного азота в пределах 96-115 мг% и общего азота 300—500 мг% титры токсина колебались от 160000 до 600000 DLM (Г. В. Шумацова, 1954).
Модифицирование среды Рамона шло также в направлении замены свиных желудков сычугами (Р. А. Хрусталева, Л. В. Калугина, 1944; Л. К. Зорина, 1944; Е. Г. Мирошниченко, 1947). Л. К. Зориной в Томском ИЭМ было изготовлено на такой среде 4000 л токсина с активностью от 160000 до 800000 DLM, а О. Е. Самойловой и М. И. Ленц (1952) на модифицированной среде Рамона получены токсины с активностью от 800000 до 1500000 Dim, М. П. Глузман, М. П. Черняков, Г. М. Старобинец (1935) для изготовления пептона применили принцип кислотного гидролиза белков под высоким давлешием. Приготовленная ими среда вошла в практику под названием бульона Глузмана. На нем, авторы получали после 14-Дневного роста при 37° токсин, убивающий морскую свинку весом 350 г в разведении 1:100000 через 62 часа. В последующие годы появилось большое количество работ, посвященных проверке качества среды Глузмана и ее модификации.
Было показано, что на этой среде получаются токсины высокого титра, однако они плохо отфильтровываются от культуры из-за повышенной вязкости и трудно обезвреживаются формалином. Для устранения этих недостатков уменьшили количество гидролизата мяса в бульоне (П. М. Мительман, Е. С. Полунова, С. Т. Скребцова, 1940; И. Е. Алатырцева, Н. А. Абрамова, 1949). Это позволило нормализовать процесс обезвреживания токсина без снижения его силы.
Л. Т. Даниелова (1948) с целью увеличения токсинообразования добавляла к среде из кислотного гидролизата белка вытяжку пивных дрожжей. О. Е. Самойлова и М. Н. Ленц (1952) предложили заменить кислотный гидролиз мяса в среде Глузмана пептическим. Выявлена была возможность изготовления пептона из мороженого китового мяса (О. П. Белинская с соавт., 1967). А. Ю. Иллютович и Н. Б. Брысовым (1957) при сравнении различных вариантов среды Глузмана показали, что лучшее токсинообразование Cl. tetani наблюдается при гидролизе мяса 3%-ной соляной кислотой при 1 атм. При этом коэффициент гидролитического расщеплении равнялся 0,22—0,28, аминный азот — 105 мг%, общий — 468 мг%. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|