Исследования в области особоопасных инфекций

Методы очистки и концентрации антитоксических сывороток (продолжение)

Сыворотки, очищенные методом водного диализа, мутнеют. Для стабилизации их физических свойств Н. С. Рогенская (1947) применила выдерживание после диализа в рефрижераторе при 6—7°.

Дальнейшим усовершенствованием очистки сыворотки от балластных веществ явилась разработка W. Ruppel (1920) метода очистки с применением электродиализа. Метод разделения основан на различной растворимости псевдоглобулинов и балластных эйглобулинов в среде, лишенной электролитов.

Далее этот метод был применен и усовершенствован Я. В. Левиным (1929, 1937).

По этому методу глобулины отделяются высаливанием сернокислым аммонием от остающегося в растворе альбумина. Затем подвергаются электродиализу. Последний приводит к фракционированию глобулинов с выпадением в осадок изолабильных эйглобулинов. Раствор изостабильного иммунного глобулина отделяется центрифугированием.

В последующем электродиализу как средству фракционирования глобулинов различных иммунных сывороток было посвящено значительное число исследований (А. В. Маркович, 1935; А. В. Маркович, И. М. Хэустова, 1938; 1942; А. В. Маркович, с соавт., 1939; В. И. Вашков, 1945; В. И. Вашков, Н. А. Курочкина, 1946 и др.).

При очистке и концентрации сывороток с применением электродиализа по сравнению с методом Банцгофа-Дзержговского сокращается по времени технологический цикл, улучшается качество и выход препарата (В. И. Вашков, Н. А. Курочкина, 1946). Однако метод не нашел широкого применения в сывороточном производстве из-за сложности аппаратуры.

Дальнейшее совершенствование метода очистки и концентрации сывороток было проведено А. В. Бейлинсон с соавт. (1949), А. В. Бейлинсон (1954). Было показано, что при очистке сывороток по Банцгофу и Дзержговекому не удаляются высокотермолабильные балластные белки из псевдоглобулиновой фракции. Для более полней очистки антитоксинов был предложен метод комбинированного диализа.

Схема метода электродиализа
Разведение сыворотки (lv) дистиллированной водой (0,5v)
Высаливание всех глобулинов ((NH4)2SO4 при 48%-ном насыщении
Фильтрат с альбуминами отбрасывается - Осадок глобулинов прессуется
Диализ до содержания 0,7—1 % (NH4)2SO4
Разбавление раствора глобулинов до 13—13,5% белка
Электродиализ
Центрифугирование
Осадок изолабильного глобулина отбрасывается - Стандартизация раствора псевдоглобулина до 0,85% NaCl и pH 7,3—7,4
Стерилизующая фильтрация

Он отличается от водного диализа разведением нативной сыворотки перед очисткой, применением сухого сернокислого аммония и двойным диализом против водопроводной, затем дистиллированной воды. Данный метод широко вошел в технологию многих сывороточных производств Советского Союза. Получаемая этим методом сыворотка имела титр антитокснна и степень очистки выше, чем при обработке водным диализом, так как удаление из псевдоглобулина дополнительно балластного белка снижало ее вязкость и позволяло выпускать препарат с 18% белка.

Из других способов очистки и концентрации сывороток, основанных на выделении антитоксина без изменения строения иммунного глобулина, следует остановиться на работах 50-х годов по выделению активных фракций при помощи различных солей тяжелых металлов (F. Gurd, D. Goodman, 1952; Н. Lasl, М. Warasinga-Rao, 1957; П. П. Толок, 1959; М. А. Торбан и Т. В. Кондрашева, 1957 и др.). Однако соли тяжелых металлов не нашли применения в практике, так как связь белка в комплексе с катионом прочна, и изоляция тяжелого металла из полученных фракций сопровождается потерями специфической активности материала.

К этому же примерно периоду относится работа ленинградских исследователей А. В. Марковича и И. М. Хаустовой (1946), обнаруживших возможность очищать и концентрировать противостолбнячную сыворотку методом коацервации. Они показали, что если к сыворотке, из которой предварительно путем электродиализа удален изолабильный глобулин, добавить гуммиарабик и раствор вторично подвергнуть электродиализу, то при этом образуется осадок (коацерват), в который переходит значительная часть антитоксина, очищенного от пассивных белков сыворотки.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202