Методы очистки и концентрации антитоксических сывороток (продолжение)
Сыворотки, очищенные методом водного диализа, мутнеют. Для стабилизации их физических свойств Н. С. Рогенская (1947) применила выдерживание после диализа в рефрижераторе при 6—7°.
Дальнейшим усовершенствованием очистки сыворотки от балластных веществ явилась разработка W. Ruppel (1920) метода очистки с применением электродиализа. Метод разделения основан на различной растворимости псевдоглобулинов и балластных эйглобулинов в среде, лишенной электролитов.
Далее этот метод был применен и усовершенствован Я. В. Левиным (1929, 1937).
По этому методу глобулины отделяются высаливанием сернокислым аммонием от остающегося в растворе альбумина. Затем подвергаются электродиализу. Последний приводит к фракционированию глобулинов с выпадением в осадок изолабильных эйглобулинов. Раствор изостабильного иммунного глобулина отделяется центрифугированием.
В последующем электродиализу как средству фракционирования глобулинов различных иммунных сывороток было посвящено значительное число исследований (А. В. Маркович, 1935; А. В. Маркович, И. М. Хэустова, 1938; 1942; А. В. Маркович, с соавт., 1939; В. И. Вашков, 1945; В. И. Вашков, Н. А. Курочкина, 1946 и др.).
При очистке и концентрации сывороток с применением электродиализа по сравнению с методом Банцгофа-Дзержговского сокращается по времени технологический цикл, улучшается качество и выход препарата (В. И. Вашков, Н. А. Курочкина, 1946). Однако метод не нашел широкого применения в сывороточном производстве из-за сложности аппаратуры.
Дальнейшее совершенствование метода очистки и концентрации сывороток было проведено А. В. Бейлинсон с соавт. (1949), А. В. Бейлинсон (1954). Было показано, что при очистке сывороток по Банцгофу и Дзержговекому не удаляются высокотермолабильные балластные белки из псевдоглобулиновой фракции. Для более полней очистки антитоксинов был предложен метод комбинированного диализа.
Схема метода электродиализа
Разведение сыворотки (lv) дистиллированной водой (0,5v)
Высаливание всех глобулинов ((NH4)2SO4 при 48%-ном насыщении
Фильтрат с альбуминами отбрасывается - Осадок глобулинов прессуется
Диализ до содержания 0,7—1 % (NH4)2SO4
Разбавление раствора глобулинов до 13—13,5% белка
Электродиализ
Центрифугирование
Осадок изолабильного глобулина отбрасывается - Стандартизация раствора псевдоглобулина до 0,85% NaCl и pH 7,3—7,4
Стерилизующая фильтрация
Он отличается от водного диализа разведением нативной сыворотки перед очисткой, применением сухого сернокислого аммония и двойным диализом против водопроводной, затем дистиллированной воды.
Данный метод широко вошел в технологию многих сывороточных производств Советского Союза.
Получаемая этим методом сыворотка имела титр антитокснна и степень очистки выше, чем при обработке водным диализом, так как удаление из псевдоглобулина дополнительно балластного белка снижало ее вязкость и позволяло выпускать препарат с 18% белка.
Из других способов очистки и концентрации сывороток, основанных на выделении антитоксина без изменения строения иммунного глобулина, следует остановиться на работах 50-х годов по выделению активных фракций при помощи различных солей тяжелых металлов (F. Gurd, D. Goodman, 1952; Н. Lasl, М. Warasinga-Rao, 1957; П. П. Толок, 1959; М. А. Торбан и Т. В. Кондрашева, 1957 и др.). Однако соли тяжелых металлов не нашли применения в практике, так как связь белка в комплексе с катионом прочна, и изоляция тяжелого металла из полученных фракций сопровождается потерями специфической активности материала.
К этому же примерно периоду относится работа ленинградских исследователей А. В. Марковича и И. М. Хаустовой (1946), обнаруживших возможность очищать и концентрировать противостолбнячную сыворотку методом коацервации. Они показали, что если к сыворотке, из которой предварительно путем электродиализа удален изолабильный глобулин, добавить гуммиарабик и раствор вторично подвергнуть электродиализу, то при этом образуется осадок (коацерват), в который переходит значительная часть антитоксина, очищенного от пассивных белков сыворотки. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|