|
Сравнение токсинообразования на различных средах
Для создания анаэробных условий к средам прибавляли наполнители в виде кусочков тканей печени, мышц, куриный вареный белок или мясной фарш, вату, поролон, фибрин, древесные опилки (Е. В. Глотова, 1934; С. И. Наследышева, 1940; С. А. Зелевинская, 1943; М. Н. Лебедева, О. М. Земцова, 1962; М. Р. Нечаевская с соавт., 1966; М. Р. Нечаевская
1968).
При сравнении токсинообразования на различных средах С. И. Наследышева (1940) лучшие результаты получила на печеночном бульоне Вейнберга, С. А. Зелевинская (1943) — на бульоне Мартена, Вейнберга и бульоне Вальбума и Раймана, М. Р. Нечаевская с соавт. (1955) — на бульоне триптического перевара мышц быка, М. А. Бычкова (1973) — на бульоне из панкреатического гидролизата казеина, затем на среде Поупа. В настоящее время большинство авторов считают, что лучшими средами при производстве токсина перфрингенс являются бульоны триптического перевара (М. Р. Нечаевская с соавт., 1955; В. Д. Никитин, 1965; М. А. Бычкова, 1973 и др.), хорошей активности токсины получают Чйй рыбо-казеиновых средах, гидролизованных при помощи грибка Aspergilus terricola (И. Н. Виноградова с соавт., 1958; 3. М. Волкова, С. А. Зелевинская, 1957; А. Олару с соавт., 1960 и др.).
Исследования, проведенные Г. П. Черкас с соавт. (1955), показали, что свежеприготовленные среды не имеют преимущества по сравнению с заготовленными впрок, что дает возможность варить бульоны в больших количествах и постепенно их расходовать.
Для получения анатоксина к токсину добавляют 0,4% формалина (40%-ного) и выдерживают в термостате при 37э в течение 24—72 часов с последующим хранением во фриго при t-80°.
Исходная сила применяемого для иммунизации антигена должна быть не меньше 100 Dlm/мл, и он должен содержать не меньше 2,5 ЕС. Следует, однако, отметить, что при изучении взаимосвязи антигенности и токсичности С. А. Зелевинская (1941), Н. Ф. Калиниченко и Л. Г. Подгорная (1970) не обнаружили между ними параллелизма. Для иммунизации лошадей используются нативный и концентрированный сернокислым аммонием антигены. Как показала М. А. Бычкова (1974), применявшая для иммунизации концентрированный антиген, он сохраняет свою активность в течение года. Следует отметить, что для иммунизации используют обезвреженный и недообезвреженный антигены, последний при содержании в крови лошади не меньше 10 МЕ/мл (Г. П. Черкас с соавт., 1955). При сравнительном изучении иммунизирующих свойств недообезврежанного и полностью обезвреженного токсинов, по данным Г. П. Черкас с соавт. (1955), более активен первый.
В качестве продуцента токсина вибриосептикум из большого количества различных штаммов этого вида наиболее антигенным являются Cl. Septicum 59, затем 282 (Ф. А. Черткова с соавт., 1952; И. А. Ларина, 3. М. Волкова, 1958; Н. Ф. Калиниченко, Л. А. Бергольцева, 1961), первый широко используется в производстве антигена. Септический вибрион образует при росте на питательных средах летальный токсин гемолизин, некротический токсин и гиалуронидазу (Ф. А. Черткова с соавт., 1952).
Возраст штамма не влияет на активности получаемых токсинов (Л. А. Бергольцева с соавт., 1968). Аналогичные результаты приводит М. А. Бычкова (1973) при использовании освеженной культуры. В качестве посевного материала применяют обычно односуточные культуры (И. А. Ларина; 3. М. Волкова, 1958; Н. Ф. Калиниченко, Л. А. Бергольцева, 1961), Температура засеваемого бульона в пределах 20—85° не влияет на активность токсинообразования (М. А. Бычкова, 1973). Для изготовления антигена используются токсины, полученные в течение 12—14 часов — по данным М. А. Бычковой (1973), до 18—20—24 часов — по другим авторам (С. А. Зелевинская, 1943; И. А. Ларина, 3. М Волкова, 1958; Н. Ф. Калиниченко, Л. А. Бергольцева, 1961; Л. А. Бергольцева с соавт., 1968) и даже до 2 суток (Е. В. Глотовой, 1934) в зависимости от интенсивности роста. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|