Исследования в области особоопасных инфекций

Очистка и концентрация антитоксических сывороток

Внедрение серотерапии и серопрофилактики в широкую медицинскую практику со второй половины 90-х годов прошлого века показало, что применение гетерогенных сывороточных препаратов сопровождается аллергическими реакциями в форме сывороточной болезни и явлений анафилаксии.

Для предупреждения анафилактического шока в 1928 г. А. М. Безредко предложил метод десенсибилизации путем двухмоментного введения сыворотки. Метод этот предохранял от анафилактического шока, но на сывороточную болезнь оказывал мало влияния.

Было замечено, что частота и тяжесть сывороточной болезни зависят от количества введенного белка, поэтому одним из путей уменьшения побочных реакций, а также повышения эффективности сывороточных препаратов является их очистка и концентрация — выделение терапевтически активных фракций сывороточных белков.

Известно, что нативная сыворотка представляет сложную систему, состоящую из белков, различающихся по химическим, физико-химическим и биологическим свойствам.

Еще в 1902 г. Е. Pick предложил классификацию сывороточных белков. Согласно ей белки при помощи сернокислого аммония делятся на 3 фракции:

1) эйглобулины, выпадающие полностью при 26% насыщения сернокислым аммонием,

2) псевдоглобулины — при 46% насыщения и

3) альбумины — при полном насыщении.

P. Howe (1921) разделил глобулин, используя сернокислый натрий. Оказалось, что псевдоглобулины водорастворимы, изостабильны, эвглобулины водонерастворимы, изолабильны.

Позднее A. Tiselius (1937) была выявлена неоднородность белков сывороток по их электрофоретической подвижности, что позволило различить альбумины, альфа-, бета- и гамма- глобулины. Каждая из названных фракций сывороточных глобулинов, в свою очередь, может быть разделена на 2 и более подфракций. В настоящее время их насчитывают до 40 (В. Weeke, 1970). Взаимосвязь между фракциями белков сыворотки, разделенных двумя методами — солевым и электрофорезом, была показана рядом авторов. По L Milne (1947), изостабильные глобулины состоят из гамма-, бета-, альфа- компонентов, а изолабильные глобулины — из гамма- и бета-компонентов.

В результате изучения белковых фракций, выделенных солевыми методами, установлено, что не все белки иммунных сывороток ответственны за ее антитоксическую активность (G. Tizzoni, L. Cattani, 1891; Е. Markus, 1899; Е. Pick, 1902; С. М. Максимович, 1904; М. А. Маркович, 1937; М. А. Маркович, А. А. Шарашкина, 1945 и др.). Так, Е. Pick (1902), исследуя противодифтерийную и противостолбнячную сыворотки лошадей, показал, что антитоксины их большей частью связаны с фракцией, которая осаждается при насыщении сернокислым аммонием от 38 до 46% концентрации.

Далее было показано, что антитела антибактериальных и антитоксических сывороток находятся в разных белковых фракциях. М. Heidelberger, F. Kendall (1934), Е. Kabat, К. Pedersen, (1938), Е. Kabat (1939) установили, что антибактериальные антитела в иммунных сыворотках лошадей-продуцентов преимущественно выделяются с белками изолабильной фракции эйглобулинами, а антитоксины с изостабильными глобулинами — псевдоглобулинами. Изучая же распределение антител во фракциях сыворотки, разделенных по признаку электрофоретической подвижности, A. Tiselius, Е. Kabat (1939), I. van der Scheer с соавт. (1940, 1941) и др. показали, что антитела в антибактериальных сыворотках преимущественно ассоциируются с гамма-глобулинами. При этом высокий титр антибактериальных сывороток сопровождается увеличением гамма-глобулинов; в антитоксических же сыворотках, как правило, не отмечается прироста гамма-глобулина, а обнаруживают появление Т-компонента — белка с электрофоретической подвижностью между гамма- и бета-глобулинами (I. van der Scheer с соавт., 1941; R. Kekwick, В. Record, 1941; С. Penfold, 1953; Н. Schultze 1954; Ю. 3. Гендон, 1958; Н. П. Ефимова, с соавт., 1959; И. И. Райхер, 1960; Р. Г. Карчхадзе, 1963 и др.). Антитоксической активностью в иммунных лошадиных сыворотках обладают гамма-, бета- и Т-глобулиновые фракции.

По насыщенности антителами разные фракции неравноценны. В. Lagel с соавт. (1950) показали, что в 1 г гамма-глобулинов изученной ими противостолбнячной сыворотки содержалось 5800 АЕ, в 1 г Т-глобулинов — 11500 АЕ, в 1 г бета-глобулинов — 8070 АЕ.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202