Контроль сывороточных препаратов. Контроль стерильности
На все гипериммунные иммуноглобулины, выпускаемые медицинской промышленностью по производству бактерийных и вирусных препаратов нашей страны, разработаны и утверждены ТУ-42.14 (технические условия), которыми наряду с показателями, определяющими качество препаратов, регламентируются схемы и методы обязательных контролей, позволяющие оценить их качество и пригодность для практического использования.
В СССР была принята схема обязательного трехступенчатого контроля всех бактерийных и вирусных препаратов непосредственно на производстве и отделах биологического контроля (ОБК) предприятий на различных этапах изготовления, и в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича (предварительный и последующий контроль готовых препаратов). Указанная схема обеспечивает использование для лечебных, профилактических и диагностических целей только тщательно проверенных, высококачественных иммуноглобулинов, прошедших установленные контроли на всех этапах.
Схемами контролей сывороточных препаратов предусматривается проверка стерильности, специфических свойств, апирогенности, безвредности, физических и физико-химических свойств, а также правильности объема налитого в ампулы или флаконы препарата, его комплектации и упаковки.
Контроль стерильности
Все выпускаемые лечебные, профилактические и диагностические сывороточные препараты должны быть свободными от бактерийной загрязненности, что обеспечивает их безвредность при практическом использовании, а также длительное сохранение первоначальных свойств. Система контроля стерильности препаратов предусматривает бактериологическую проверку на микробную обсемененность нативных сывороток, полуфабрикатов на разных стадиях технологического цикла, готового препарата до и после розлива.
Образцы для контроля стерильности неразлитой продукции берут после тщательного перемешивания содержимого бутыли с сывороткой. В процессе розлива препарата на контроль берут образцы в начале, середине и конце розлива. Для проверки стерильности готового разлитого препарата используют от каждой серии не менее четырех образцов. Последние предварительно выдерживают 3 дня в термостате и затем засевают.
Посев производят на среды, имеющие паспорт и предварительно проверенные на интенсивность роста в них тест-микробов. Для этого применяют следующий набор питательных сред: тиогликолевая среда, питательный бульон с 0,5% глюкозы, питательный агар с 0,5% глюкозы, среда Сабуро жидкая.
Испытание стерильности проводят путем засева выемки по 1 мл в три пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Одну из засеянных пробирок выдерживают 10 дней при температуре 20—22°, две другие помещают в термостат при 37°. Спустя 5 суток из одной пробирки, выдержанной при 37°, делают пересевы по 0,5 мл на скошенный агар с 0,5% глюкозы, на питательный бульон с 0,5% глюкозы и среду Сабуро (жидкую). Пересевы на агар и бульон выдерживают еще 5 суток при 37°, а пересев на среду Сабуро 5 суток при 20—22°.
Учет результатов первичного и повторного посевов производят через 10 суток путем макроскопического, а в случае пророста и микроскопического исследования всех посевов.
В случае пророста хотя бы в одной из засеянных пробирок контроль на стерильность повторяют. В этом случае полуфабрикат сеют на удвоенном наборе питательных сред, т. е. образец на 6 пробирок с тиогликолевой средой и дальше по указанной выше схеме. При отсутствии пророста в повторном контроле препарат признают стерильным. При наличии в повторном контроле хотя бы частичного пророста полуфабрикат признают нестерильным и при отсутствии в препарате видимого роста подвергают его стерилизующей фильтрации с последующим контролем на стерильность. Для проверки готовой серии берут утроенное количество образцов, засевая каждый из них на 3 пробирки с тиогликолевой средой и далее по схеме контроля. При отсутствии пророста в повторном контроле препарат признают стерильным. При наличии хотя бы частичного пророста (в части посевов) препарат бракуют как нестерильный.
В процессе очистки и концентрации сыворотки определяют степень обсемененности на различных этапах технологического процесса. Для этого берут 6 пробирок с 5 мл мясо-пептонного бульона в каждой. Исследуемый материал в количестве 0,1 мл вносят в первую пробирку с бульоном, перемешивают и 1 мл из первой пробирки переносят во вторую с бульоном, из нее таким же образом в третью и т. д., используя для каждого разведения отдельную стерильную пипетку. Засеянный материал в бульоне помещают на одни сутки в термостат при 37°, после чего регистрируют результаты посева в рабочем журнале. Плазма после ее выделения из крови на сепараторах должна быть стерильной. В порядке исключения допускается бактериальный рост в первой пробирке. После добавления соли к плазме считается допустимым при посеве рост бактерий не далее 3-й пробирки. В отпрессованных глобулинах плазмы последний также не должен отмечаться далее 3-й пробирки. При более высокой обсемененности необходимо срочно устранить ее причину. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|