Исследования в области особоопасных инфекций

Люминесцирующая сыворотка

В последние годы с целью диагностики ряда инфекционных заболеваний, изучения их патогенеза, иммуногенеза и индикации патогенных возбудителей во внешней среде широко применяется метод флуоресцирующих антител, впервые предложенный A. Coons с соавт. в 1942 г. В основе его лежит использование реакции антиген-антитело, наблюдаемой при соединении антигенов со специфическими антителами, мечеными различными флуоресцирующими красителями, В литературе представлен достаточно большой материал, посвященный методам изготовления флуоресцирующих сывороток. Имеются специальные монографии, посвященные этому вопросу (И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961; Ю. Н. Зубжицкий, 1964; Е. Н. Левина, Р. Б. Гольдин, Ф. С. Носков, К. Л. Шаханина, В. Е. Барский, 1972). В связи с этим в рассматриваемом разделе приводятся основные данные по изготовлению указанной сыворотки.

В исследовательской практике и диагностике широкое применение нашли три модификации метода: прямой (А. Соons, М. Kaplan, 1950), непрямой (Т. Wellar, A. Coons, 1954) и непрямой с добавлением комплемента (R. Goldwasser, С. Shepard, 1958). При первом методе исследования на фиксированный препарат наносят соответствующую люминесцирующую сыворотку, затем ее излишек удаляют, промывая препарат, и просматривают в люминесцентном микроскопе. Данный метод применяется с целью выявления микробов во внешней среде, тканях и других объектах.

Второй состоит из двух этапов. Вначале на препарат наносится нелюминесцирующая гомологичная иммунная сыворотка, препарат промывают, и наслаивается люминесцирующая сыворотка против глобулина. Препарат вновь промывается и рассматривается под микроскопом.

Наконец, третий включает 3 этапа обработки. Вначале на антиген наслаивается намеченое антитело, затем нормальная сыворотка, содержащая комплемент, а затем люминесцирующая антикомплёментарная сыворотка, приготовленная путем иммунизации кроликов сывороткой крови того вида животных, которые служили источником комплемента.

Обе непрямые модификации чаще используются в случае ограничения набора специфических иммунных люминесцирующих сывороток, или люминесцирующих сывороток против глобулинов животных. Преимуществом непрямых методов перед прямым является их большая чувствительность и то, что, имея одну люминесцирующую сыворотку, можно обнаружить ряд антигенов. С целью приготовления нативных сывороток для прямого метода животные-продуценты иммунизируются микробными, токсическими или вирусными антигенами по схемам, обеспечивающим максимальное накопление специфических антител в относительно короткий срок. С целью изготовления нативных сывороток для непрямого метода в качестве антигенов берутся чистые фракции иммуноглобулинов нормальных сывороток животных. Чаще всего кроликов, морских свинок, баранов, свиней, лошадей, человека.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202