Сыворотка против яда змеи эфа. Поливалентная противоядная сыворотка
М. И. Максианович (1940), А. С. Садыков (1961) для получения гипериммунной сыворотки против яда змеи эфы
(Echiscarinatus - род ядовитых змей из семейства гадюк) в качестве антигена использовали формалинизированный яд. Авторам удалось получить лошадиную нативную сыворотку антиэфа, однако она обладала чрезвычайно низкой активностью, не превышающей 1,5—2,0 DCL/мл при титровании на кроликах.
Р. Л. Джавакова с соавт. (1971), А. А. Абидов с соавт. (1972) сравнили 2 схемы иммунизации на двух группах лошадей.
Одна группа лошадей (контрольная) иммунизировалась 1%-ным анаядом эфы с 5-дневными интервалами по схеме
3—6—12—20—30—40-50 мл, что соответствовало 30—60—120—200—300—400—500 мг яда. Всего израсходовано 1,61 г яда. В качестве депонента использовалась ланолиново-масляная эмульсия с каждой дозой антигена (6—10—15-30—35—40—50 мл адъюванта).
Вторая группа (опытная) иммунизировалась нативным ядом 0,1—0,2—0,4—0,7 мг с интервалами в 2—3 дня, затем через 5 дней 1—2—4—7—10-20-30-40-60—100 мг яда. Всего около 300 мг. Последующие циклы состояли из 10 инъекций и начинались с 1 мг яда. Депонент в виде ланолиновомасляной эмульсии применялся дважды в каждом цикле (в 1-м — с 9-й и 11-й инъекциями, в последующих — с 5-й и 6-й инъекциями). Кровь забиралась на 6-й день после иммунизации.
Авторы показали, что при иммунизации анаядом титры антител были низкие: после 6-го цикла меньше 5 АЕ/мл, в концентрированной — 8—10 АЕ/мл, в то время как при иммунизации ядом — 70—120 АЕ/мл и 250—370 АЕ соответственно.
Сыворотка против яда эфы была очищена и сконцентрирована методом Диаферм (Р. Л. Джавакова с соавт., 1971). В готовом препарате нагрузка на 0,1 г белка в среднем равнялась 180 DSL.
Поливалентная противоядная сыворотка (антигюрза, антиэфа, антикобра)
В связи со специфичностью иммуноглобулинов гипериммунных противозмеиных сывороток для эффективности серотерапии необходимо знать вид змеи, совершившей укус. Однако в связи с большим разнообразием их в отдельных районах определить вид змеи не всегда представляется возможным. В этих случаях использование поливалентной противоядной сыворотки способно вызвать нужный лечебный эффект. Приготовление такой сыворотки было осуществлено А. А. Абидовым с соавт. (1972).
Для производства поливалентной сыворотки против ядов гюрзы, эфы и кобры авторы использовали 2 продуцентов иммуноглобулина антигюрза. Животных иммунизировали возрастающими дозами трех ядов змей: гюрзы, эфы и кобры, которые брались в равных весовых соотношениях в сумме от 0,2 до 50 мг яда и вводились в виде 10—12 инъекций. Авторы показали, что при такой постановке опыта отмечается нарастание титра антител в первых трех циклах только к яду гюрзы и эфы до 15—20 АЕ/мл и 10—15 АЕ/мл соответственно, их не обнаруживалось к яду кобры. Увеличение доли яда кобры в следующих циклах и иммунизация антигеном в суммарной дозе от 1 до 100 мг в соотношении: 1 часть яда гюрзы — 1,5 части яда эфы — 2 части яда кобры способствовало увеличению антител ко всем ядам особенно после последних трех доз антигена (60—80—100 мг). Титр антител уже в 4-м цикле был против яда гюрзы 30—40 АЕ/мл, эфы — около 20 АЕ и кобры — 8 АЕ/мл. Циклы заканчивались двумя кровопусканиями по 6 л крови.
В последующих циклах иммунизации (начиная с 6-го) число инъекций было сокращено до 6. Антиген вводился и дозах от 10 до 100 мг всех трех ядов. Титры сыворотки были: антигюрза — 15 АЕ/мл, антиэфа — 20 АЕ/мл и антикобра — 5 АЕ/мл.
При переводе под поливалентную иммунизацию продуцентов иммуноглобулина антикобра и содержащих в сыворотке после 3-го цикла моновалентной иммунизации от 1,5 до 5 АЕ/мл позволяет также получить поливалентную сыворотку, содержащую антитела в титре 1,5 АЕ/мл — антигюрза, 15 АЕ/мл — антиэфа и 8 АЕ/мл — антикобра.
Сыворотка очищалась и концентрировалась методом Диаферм-3. В концентрированном виде она содержала антитела против всех 3 видов в количестве 60—90 АЕ/мл - антигюрза, 60—80 АЕ/мл — антиэфа и 10—15 АЕ/мл — антикобра.
Для выявления силы противоядных сывороток М. И. Максианович (1949) титровал их на кроликах путем внутривенного введения смеси испытуемой сыворотки с безусловно смертельной дозой (DCL) яда.
А. С. Садыков (1953, 1955) предложил титровать сыворотки антиэфа на белых мышах, а М. С. Сулейманян (1955) аналогично сыворотки антигюрза. Принцип метода заключался во внутривенном введении животным выдержанной при 37° 30 минут смеси сыворотки с одной DCL яда в объеме 0,5 мл физиологического раствора.
В настоящее время активность противозмеиных сывороток проверяется на белых мышах весом 16—18 г при помощи реакции нейтрализации. Для этого 0,2 мл различных разведений сыворотки соединяется с 0,3 мл опытной дозы яда, прититрованного к 1 АЕ национального стандарта, и после 45-минутной экспозиции при 37° вводится внутривенно белым мышам. Максимальное разведение сыворотки, которое в смеси с опытной дозой яда предохраняет от гибели 50% белых мышей, содержит 1 АЕ в 0,2 мл разведения или 5 АЕ в 1 мл. Титр испытуемой сыворотки получают, умножая 5 АЕ на разведение сыворотки.
Как мы уже указывали, противозмеиная сыворотка выпускается в очищенном и концентрированном методом Диаферм-3 виде. Во Франции предложена очистка методом спиртового осаждения.
Для лечения укушенных противозмеиная сыворотка вводится как можно раньше в зависимости от степени интоксикации: при легкой степени отравления — 500—1000 АЕ, при средней тяжести — 1500 АЕ, при тяжелых случаях — 2000—2500 АЕ, при этом при легкой и средней тяжести болезни сыворотка вводится подкожно, при тяжелой внутривенно (М. Щ Султанов, 1971). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|