|
Питательные среды для приготовления дифтерийного токсина
В годы второй мировой войны для приготовления дифтерийного токсина применяли питательные среды, которые состояли из продуктов расщепления папаином конины (последняя является отходом сывороточного производства) и получали токсины от 40 до 50 Lf (G. Ramon с соавт., 1941, 1942).
Высокоантигенные дифтерийные токсины можно получать на средах триптического переваривания, в том числе на среде Попе (С. Pope, L. Smith, 1932; П. Речменская, 1937; А. Конова, Л. Базилевская 1936; М. Колманян, А. Оганова, 1938; В. Геккер, А. Бейлинсон, 1943 и др.). Однако большое содержание в ней общего и аминного азота приводит подчас к плохому обезвреживанию токсинов.
Следует иметь в виду, что на качество бульона триптического переваривания большое влияние оказывает биологическая активность суспензии поджелудочной железы.
А. Н. Лобанова с соавт. (1973) указывают, что она должна бьтть не ниже 4000 ед. Гроссе.
М. П. Вагнер-Сахарова с соавт. (1956) предложили для культивирования дифтерийной палочки среду триптического расщепления, в котороймясо переварено сухим панкреатином при дробном его прибавлении. Авторы получили на этой среде более активные, чем на бульоне Мартена, токсины, которые в отличие от токсинов на среде Попе легко обезвреживались при детоксикации.
Высокой активности токсины получаются при культивировании штамма Вейсензее на питательной среде, переваренной смесью ферментов трипсином и энтерокиназой (П. В. Павлов, А. Г. Леонова, 1960).
С целью получения дифтерийного токсина Е. Г. Свириденко (1963) предложила использовать бульоны, приготовленные из автолизатов каспийской кйльки глубинного улова, атеринки и отходов оельдй в консервной промышленности. На данной среде активность токсина достигала 40—68 АЕ/мл.
Для приготовления дифтерийного токсина предлагались различные полусинтетические среды. Так, Л. Д. Кашевник, Л. Н. Березнеговская и А. Д. Боярская в ТомНИИВС. (1949) применили среду, состоящую из кислотного гидролизата казеина, сухого пептона, мясной воды, хлористых солей магния, марганца, серноквслых солей меди, цинка, экстракта пекарских дрожжей, никотиновой кислоты, цистина и уксуснокислото буфера.
На полусинтетических средах получали дифтерийные токсины также В. Н. Мирскова, Л. В. Калугина (1953), В. Н. Кикалишвили с соавт. (1965).
Сравнительный анализ качества токсина, приготовленного при использовании различных штаммов и на различных питательных средах, полученных перевариванием трипсином (бульон Вагнер-Сахаровой), трипсином с энтерокиназой, а также пепсином (бульон Мартена), показал, что высокие титры антигена дает штамм Вейсензее на среде Вагнер-Сахаровой с очищенной мальтозой (П. В. Павлов с соавт., 1960; О. В. Савицкая с соавт., 1965). На питательной среде триптического перевара ферментами трипсином и энтерокиназой. П. В. Павлов с соавт. (1960) при использовании штамма Вейсензее также получили высокоактивный дифтерийный токсин, содержащий 80—120 Lf/мл. Аналогичные данные приводит Р. В. Федоров (1963). Однаш следует указать, что и до настоящего времени приготовление антигена для гипериммунизации лошадей проводится на бульоне Мартена.
На интенсивность токсинообразования оказывают влияние многие факторы: температура выращивания, запас воздуха над средой, качество стекла, используемого для культивирования, наличие в среде факторов роста (U. Mueller, 1939), различных солей (Н. Broun с соавт., 1925; A. Berthe- lot, G. Ramon, 1925; С. П. Карпов, Н. И. Антонов, 1934; А. И. Гороховникова с соавт., 1935; A. Pappenheimer, Е. Hendler, 1947; Э. 3. Рахман с соавт., 1954; В. Н. Мирскова, 1955; Н. И. Шапиро с соавт., 1965; Ю. А. Хавкин, Э. Н. Акатова, 1973), аминокислот (В. И. Шанина-Вагина, М. П. Вагнер-Сахарова, 1955), добавление сахаров (А. Гороховникова с соавт., 1935; С. Н. Предтеченокий, 1938; А. Н. Лобанова с соавт., 1973 и др.). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|