Исследования в области особоопасных инфекций

Применение фенола в стадии ферментативного расщепления

Для улучшения процесса обработки сывороток А. И. Михайлов, Е. Н. Рогозина (1956) применили фенол в стадии ферментативного расщепления из расчета 0,25% к нативной сыворотке. Это обеспечило повышение концентрации антитоксина и нагрузку его на 1 г белка. Авторы наблюдали увеличение выхода антитоксина на 5—7%.

На положительное влияние фенола указывают также Т. В. Кондрашкова (1957), В. П. Федорчук, И. Л. Теодорович (1958).

Лишь отдельные авторы (В. М. Кушнарев с соавт., 1958) отмечают увеличение потерь антитоксина при добавлении фенола.

С целью повышения степени очистки сывороток и рентабельности их производства предлагались способы дополнительного удаления балластных белков.

На возможность применения с этой целью сорбентов указывали A. Hansen (1948), A. Harms (1948).

В 1953 г. К. X. Хаджиев применил предварительную (перед ферментацией) обработку противодифтерийной сыворотки бентонитом, гидратом окиси алюминия. Автор отмечает, что при дополнительной очистке сывороток от балластных белков уменьшаются потери антитоксина и повышается степень очистки препарата. На это же указывают А. И. Михайлов с соавт. (1965), которые наблюдали помимо уменьшения потерь антитоксина сокращение в 2 раза расхода пепсина.

В. П. Федорчук (1963, 1965), Н. И. Сипяшин с соавг. (1971) также отмечают, что применение бентонитовых глин увеличивает нагрузку антитоксина на белок, кроме того, как указывает В. П. Федорчук, освобождает ферментированный материал от пигментации и основной массы эвглобулинов.

А. В. Бейлинсон (1954), X. М. Воденичарова (1960) с целью повышения степени очистки использовали предварительное высаливание сернокислым аммонием общих глобулинов, Ю. А. Хавкин (1960) применил риванол.

С целью повышения рентабельности производства более дорогая лимонная кислота в методе Диаферм-3 была заменена соляной (А. И. Михайлов с соавт., 1958; С. М. Прегер, А. П. Дутова, 1960). С. М. Прегер, А. П. Дутовой (1959), С. Н. Киняпиной и М. Г. Амирхановой (1965) было показано, что можно уменьшить количество пепсина без ущерба для выхода антител и степени очистки.

Была проведена большая работа по уменьшению механических потерь антитоксина на этапах очистки и концентрации путем отжатия под прессом миткалевых мешков с балластным белком и сбора фильтрата, замачивания мешков после освобождения их от антитоксина и использования при стерилизующей фильтрации сывороток фильтровальных пластин с последующим высаливанием оставшегося антитоксина и т. д. (С. М. Прегер, А. П. Дутова, 1956).

Метод Диаферм-3 предусматривает применение на III стадии очистки сыворотки от балластных белков хлороформа, последний загрязняет воздух рабочих помещений, ухудшая тем самым гигиенические условия работы и вызывает острую токсичность сывороток до выветривания хлороформа до допустимой нормы.

Для замены его на данной стадии очистки термостабильного глобулина от остаточных количеств балластных термолабильных продуктов протеолиза были применены фосфат и гидроокись алюминия (Л. Н. Изумрудова с соавт. 1964; В. П. Федорчук, 1965; В. П. Федорчук, А. Н. Якубова, 1965; А. И. Михайлов, с соавт. 1965; В. П. Федорчук, М. Г. Амирханова, 1966; В. Б. Фрейман с соавт., 1966; 1968; 1972; Л. Н. Изумрудова с соавт., 1966).

Комитет вакцин и сывороток по представлению Ташкентского НИИВС 11 июля 1964 г. утвердил применение суспензии фосфата алюминия взамен хлороформа на III стадии очистки ферментированных сывороток и в настоящее время оно вошло в регламент очистки и концентрации противостолбнячной сыворотки.

Н. Л. Домбровская с соавт. (1965) получили высокую степень очистки антитоксина без применения термоденатурации при сочетании сорбции на I и III стадиях и применения высаливания на II стадии фракционирования. Наилучшими средствами для удаления балластных белков явились уксуснокислый цинк, алюмокалиевые квасцы и фосфат алюминия.

На это же указывают В. И. Трубицина с соавт. (1971). Хорошие результаты получены ими при применении геля гидрата окиси алюминия в момент его образования из растворов алюмокалиевых квасцов и едкого натра.

Ю. Б. Лукин с соавт. (1972) повысили степень очистки и коэффициент концентрации, обработав очищенную сыворотку гелем гидроокиси алюминия с последующей ультрафильтрацией.

В результате работы над совершенствованием метода неполного протеолиза сывороток сотрудниками Московского НИИВС (В. Б. Фрейман с соавт., 1966; 1968; 1972) была предложена модификация метода Диаферм-3. Она предусматривает более щадящую очистку противостолбнячной сыворотки; протеолиз проводится в течение одного часа при pH 3,25, кроме того, обработка диализата хлороформом заменена на обработку гидроокисью алюминия, вследствие чего исключается необходимость применения сепараторов марки АС-З-Е.

Несмотря на высокую удельную активность гетерогенных сывороток, очищенных с применением ферментолиза, в них определяется в пределах 57—75% неактивных белков (I. Parfentjev, Е. Robinson, 1938; Т. Largier, 1958).

Наличие в таких сыворотках балластного белка способствует при их применении выработке в организме антиглобулинов, снижающих эффект пассивной защиты (А. Т. Кравченко, Ф. Ф. Резепов, 1957; Г. Н. Крыжановский с соавт., 1960; Г. Н. Крыжановский, П. П. Алскссев, 1969; В. В. Пушкарев, 1971). Кроме того, при хранении сыворотки, обработанные Диаферм-3, мутнеют и дают осадок. Как показали С. М. Прегер, Я. И. Пухова, М. В. Ярунцева (1966), осадок состоит из липидов.

В связи с этим обстоятельством, помимо совершенствования указанных методов очистки, проводилась интенсивная работа по созданию новых технологических схем.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202 


На www.cofeland.ru улун купить в москве.