Исследования в области особоопасных инфекций

Нативные сыворотки при приготовлении люминесцирующих сывороток

Нативные сыворотки, используемые для приготовления люминесцирующих сывороток, должны быть высокоспецифичными и высокоактивными (И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961; П. И. Притулин, 1961; Ю. Н. Зубжицкий, 1964; К. Л. Шаханина, 1968). При этом показано (Р. Б. Гольдин, 1970), что красящая способность конъюгатов тесно связана с авидностью сыворотки.

Сыворотки можно готовить на животных (лошади, ослы, бараны, козы, кролики, морские свинки, белые мыши) и даже птицах (куры). Для гипериммунизации используются различные схемы введения антигена. Наиболее принят внутривенный способ (И. Ф. Михайлов, С. М. Дьяков, 1961). Хорошие результаты отмечаются при чередовании места введения антигена. При этом оптимальный прирост титра антител наблюдается при условии одновременного применения антигена внутривенно и подкожно, внутривенно и внутри-конъюнктивально (Ю. Н. Зубжицкий, 1969) либо внутривенно и внутрибрюшинно (Р. Б. Гольдин с соавт., 1970). Значительно усиливает иммуногенез использование различных адъювантов и прежде всего типа Фрейнда и гидроокиси алюминия.

Кровопускание осуществляется, как правило, на 7—10-й день после последнего введения антигена.

Для метки можно применять как цельную нативную сыворотку, так и ее глобулиновые фракции. Последние могут быть получены различными методами. Чаще всего используют методы фракционирования концентрированными растворами сульфата аммония (А. И. Глубокина с соавт., 1960; Е. П. Столбиков, 1961) или сернокислого натрия (Е. П. Столбиков, 1961; И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961). Хорошие результаты отмечены при концентрации метиловым (С. Carter, G. Leise, 1958), этиловым (И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961) спиртами, сульфатно-риваноловым методом и выделением гамма-глобулина на ДЭАЭ-сефадексе А-50 (К. Л. Шаханина, 1968).

Полученный высаливанием осадок глобулинов растворяют и диализируют против 0,15 М физиологического раствора pH 7,0. С этой целью раствор белка помещают в целлофановые мешочки и опускают в физиологический раствор, на 3—5-й день, который меняется 2—3 раза в день. Процедура проводится при температуре 0—4°. Очистку сыворотки можно осуществлять гель-фильтрацией на сефадексе или хроматографией на ионообменных смолах (К. Л. Шаханина, 1968).

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202