|
Нативные сыворотки при приготовлении люминесцирующих сывороток
Нативные сыворотки, используемые для приготовления люминесцирующих сывороток, должны быть высокоспецифичными и высокоактивными (И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961; П. И. Притулин, 1961; Ю. Н. Зубжицкий, 1964; К. Л. Шаханина, 1968). При этом показано (Р. Б. Гольдин, 1970), что красящая способность конъюгатов тесно связана с авидностью сыворотки.
Сыворотки можно готовить на животных (лошади, ослы, бараны, козы, кролики, морские свинки, белые мыши) и даже птицах (куры). Для гипериммунизации используются различные схемы введения антигена. Наиболее принят внутривенный способ (И. Ф. Михайлов, С. М. Дьяков, 1961). Хорошие результаты отмечаются при чередовании места введения антигена. При этом оптимальный прирост титра антител наблюдается при условии одновременного применения антигена внутривенно и подкожно, внутривенно и внутри-конъюнктивально (Ю. Н. Зубжицкий, 1969) либо внутривенно и внутрибрюшинно (Р. Б. Гольдин с соавт., 1970). Значительно усиливает иммуногенез использование различных адъювантов и прежде всего типа Фрейнда и гидроокиси алюминия.
Кровопускание осуществляется, как правило, на 7—10-й день после последнего введения антигена.
Для метки можно применять как цельную нативную сыворотку, так и ее глобулиновые фракции. Последние могут быть получены различными методами. Чаще всего используют методы фракционирования концентрированными растворами сульфата аммония (А. И. Глубокина с соавт., 1960; Е. П. Столбиков, 1961) или сернокислого натрия (Е. П. Столбиков, 1961; И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961). Хорошие результаты отмечены при концентрации метиловым (С. Carter, G. Leise, 1958), этиловым (И. Ф. Михайлов, С. И. Дьяков, 1961) спиртами, сульфатно-риваноловым методом и выделением гамма-глобулина на ДЭАЭ-сефадексе А-50 (К. Л. Шаханина, 1968).
Полученный высаливанием осадок глобулинов растворяют и диализируют против 0,15 М физиологического раствора pH 7,0. С этой целью раствор белка помещают в целлофановые мешочки и опускают в физиологический раствор, на 3—5-й день, который меняется 2—3 раза в день. Процедура проводится при температуре 0—4°. Очистку сыворотки можно осуществлять гель-фильтрацией на сефадексе или хроматографией на ионообменных смолах (К. Л. Шаханина, 1968). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|