|
Сыворотка против яда змеи гюрза
До недавнего времени для получения сыворотки против яда змеи гюрзы (Vipera lebetina), нейтрализующей также яды армянской, степной и обыкновенной гадюк, применяли анаяд в ланолиново-масляной смеси.
Детоксикация яда достигалась путем добавления 0,8% формалина и выдерживания в термостате в течение 14 суток при температуре +39°.
Для приготовления гипериммунной сыворотки против яда гюрзы лошадей иммунизировали однопроцентным раствором анаяда по схеме: 1-й подготовительный цикл — 3—6—10— 15—20—35—70 мл антигена, соответствующего 30—60—100— 150—200—350—700 мг яда, при этом ланолиново-масляный адъювант добавлялся к каждой инъекции антигена в размере 6—12—15—20—25—45—75 мл. Интервалы между инъекциями составляли 5 дней. Последующие циклы начинались через 16 дней и состояли из 3 инъекций антигена по схеме 30 мл (эквивалентного 300 мг яда) — 60 мл (600 мг яда) — 90 мл (900 мг яда). Соответственно добавлялся адъювант в количествах 35—60—90 мл. Цикл заканчивался двух-, трехкратными кровопусканиями лошадей (Р. Л. Джавакова, 1972).
Активность иммунных сывороток, получаемых при гипериммунизации продуцентов однопроцентным анаядом, была низкая и не превышала 10—15 АЕ/мл (А. А. Ушакова, 1965; Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова, 1968; А. Л. Погуда, 1971).
Для повышения качества гипериммунной сыворотки против яда гюрзы в Ташкентском институте вакцин и сывороток разработали схему использования для иммунизации лошадей нативного яда. Последний в высушенном виде хранился над хлористым кальцием в стеклянных темных флаконах из нейтрального стекла. Перед употреблением кристаллический яд растворяется в смеси из 50% глицерина и 50% физиологического раствора.
Для иммунизации Н. И. Синяшин и Р. Л. Джавакова (1968), Р. Л. Джавакова (1972) применили нативный яд в сочетании с сорбатом на основе геля гидроокиси алюминия. Последний получали путем растворения сухого яда в 4,2%-ном растворе хлористого алюминия, нейтрализации раствора бикарбонатом натрия до pH 7,0. Авторы показали, что при этом происходит разделение иммуногенных компонентов, часть из них выпадает с сорбатом, а другая остается в растворе. Токсический фактор содержится только в растворе. Иммунизация проводилась по схеме 5—8—14 мл антигена, содержащего соответственно 25—40—70 мг яда. Было показано (Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова, 1968), что при иммунизации лошадей сорбатом титр сыворотки антигюрза был в 2,5 раза выше, чем при иммунизации анаядом (25 МЕ/мл против 10 МЕ/мл) при этом расход яда резко сокращался (135 мг и 1550 мг соответственно). Однако Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова (1968) отмечают, что при использовании яда, сорбированного на геле гидроокиси алюминия, у лошадей наблюдаются абсцессы. Применение же для иммунизации яда с фосфатом кальция не вызывало нежелательных осложнений (Н. И. Синяшин с соавт., 1968; Р. Л. Джавакова с соавт., 1971; Р. Л. Джавакова, 1972).
В настоящее время для производства сыворотки антигюрза применяется сорбат, состоящий из нативного яда гюрзы и фосфата кальция. Антиген готовят следующим образом: заранее рассчитывают количество сухого яда гюрзы, растворяют его в 0,008 М раствора двухзамещенного фосфата натрия, после чего стерилизуют через свечи Шамберляна. К подготовленному стерильному раствору добавляют стерильный 0,45 М раствор хлористого кальция непосредственно перед иммунизацией в количестве, чтобы соотношение яда и фосфата кальция было равно 1:1.
Такая взвесь, содержащая в мл 1 мг яда и 1 мг фосфата кальция, обладает почти в 1,5 раза меньшей токсичностью, чем исходный яд. Иммунизация лошадей 7 инъекциями в 1-м цикле и 3 — во 2-м способствовала получению сыворотки в 6 раз с большим титром, чем при иммунизации анаядом. При этом несколько уменьшалась длительность цикла и расход яда по сравнению с тем, что наблюдается при использовании анаяда.
Р. Л. Джавакова (1972) отмечает, что при иммунизации анаядом с ланолиново-масляной эмульсией титры нативных сывороток составляют в среднем 12 АЕ/мл, концентрированных 77 АЕ/мл, нагрузка — 68 АЕ на 0,1 г белка, при иммунизации ядом с фосфатом кальция — соответственно 81 — 283—295 АЕ/мл (Р. Л. Джавакова, 1972).
Наряду с высокой антилетальной активностью сыворотки лошадей против яда гюрзы, полученные при иммунизации нативным ядом, обладают антигемолитичеcкой, антикоагулирующей, антигиалуронидазной активностью, в то время как сыворотки продуцентов, иммунизированных анаядом, почти полностью лишены этих свойств (А. А. Погуда, 1971).
Сыворотка выпускается в очищенном виде. Б. А. Васильев (1962, 1965) провел сравнительную оценку различных технологических схем очистки противоядной антигюрза сыворотки и предложил использовать с этой целью метод, основанный на осаждении белков риванолом с последующим пептическим гидролизом и концентрацией их ацетоном.
А. А. Абидов с соавт. (1971), Л. Е. Иванова (1972) указывают, что при выпуске жидких препаратов рентабелен метод Диаферм-3, а при изготовлении сухих лучшие результаты дает один из вариантов метода Просдис. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|