Исследования в области особоопасных инфекций

Сыворотка против яда змеи гюрза

До недавнего времени для получения сыворотки против яда змеи гюрзы (Vipera lebetina), нейтрализующей также яды армянской, степной и обыкновенной гадюк, применяли анаяд в ланолиново-масляной смеси.

Детоксикация яда достигалась путем добавления 0,8% формалина и выдерживания в термостате в течение 14 суток при температуре +39°.

Для приготовления гипериммунной сыворотки против яда гюрзы лошадей иммунизировали однопроцентным раствором анаяда по схеме: 1-й подготовительный цикл — 3—6—10— 15—20—35—70 мл антигена, соответствующего 30—60—100— 150—200—350—700 мг яда, при этом ланолиново-масляный адъювант добавлялся к каждой инъекции антигена в размере 6—12—15—20—25—45—75 мл. Интервалы между инъекциями составляли 5 дней. Последующие циклы начинались через 16 дней и состояли из 3 инъекций антигена по схеме 30 мл (эквивалентного 300 мг яда) — 60 мл (600 мг яда) — 90 мл (900 мг яда). Соответственно добавлялся адъювант в количествах 35—60—90 мл. Цикл заканчивался двух-, трехкратными кровопусканиями лошадей (Р. Л. Джавакова, 1972).

Активность иммунных сывороток, получаемых при гипериммунизации продуцентов однопроцентным анаядом, была низкая и не превышала 10—15 АЕ/мл (А. А. Ушакова, 1965; Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова, 1968; А. Л. Погуда, 1971).

Для повышения качества гипериммунной сыворотки против яда гюрзы в Ташкентском институте вакцин и сывороток разработали схему использования для иммунизации лошадей нативного яда. Последний в высушенном виде хранился над хлористым кальцием в стеклянных темных флаконах из нейтрального стекла. Перед употреблением кристаллический яд растворяется в смеси из 50% глицерина и 50% физиологического раствора.

Для иммунизации Н. И. Синяшин и Р. Л. Джавакова (1968), Р. Л. Джавакова (1972) применили нативный яд в сочетании с сорбатом на основе геля гидроокиси алюминия. Последний получали путем растворения сухого яда в 4,2%-ном растворе хлористого алюминия, нейтрализации раствора бикарбонатом натрия до pH 7,0. Авторы показали, что при этом происходит разделение иммуногенных компонентов, часть из них выпадает с сорбатом, а другая остается в растворе. Токсический фактор содержится только в растворе. Иммунизация проводилась по схеме 5—8—14 мл антигена, содержащего соответственно 25—40—70 мг яда. Было показано (Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова, 1968), что при иммунизации лошадей сорбатом титр сыворотки антигюрза был в 2,5 раза выше, чем при иммунизации анаядом (25 МЕ/мл против 10 МЕ/мл) при этом расход яда резко сокращался (135 мг и 1550 мг соответственно). Однако Н. И. Синяшин, Р. Л. Джавакова (1968) отмечают, что при использовании яда, сорбированного на геле гидроокиси алюминия, у лошадей наблюдаются абсцессы. Применение же для иммунизации яда с фосфатом кальция не вызывало нежелательных осложнений (Н. И. Синяшин с соавт., 1968; Р. Л. Джавакова с соавт., 1971; Р. Л. Джавакова, 1972).

В настоящее время для производства сыворотки антигюрза применяется сорбат, состоящий из нативного яда гюрзы и фосфата кальция. Антиген готовят следующим образом: заранее рассчитывают количество сухого яда гюрзы, растворяют его в 0,008 М раствора двухзамещенного фосфата натрия, после чего стерилизуют через свечи Шамберляна. К подготовленному стерильному раствору добавляют стерильный 0,45 М раствор хлористого кальция непосредственно перед иммунизацией в количестве, чтобы соотношение яда и фосфата кальция было равно 1:1.

Такая взвесь, содержащая в мл 1 мг яда и 1 мг фосфата кальция, обладает почти в 1,5 раза меньшей токсичностью, чем исходный яд. Иммунизация лошадей 7 инъекциями в 1-м цикле и 3 — во 2-м способствовала получению сыворотки в 6 раз с большим титром, чем при иммунизации анаядом. При этом несколько уменьшалась длительность цикла и расход яда по сравнению с тем, что наблюдается при использовании анаяда.

Р. Л. Джавакова (1972) отмечает, что при иммунизации анаядом с ланолиново-масляной эмульсией титры нативных сывороток составляют в среднем 12 АЕ/мл, концентрированных 77 АЕ/мл, нагрузка — 68 АЕ на 0,1 г белка, при иммунизации ядом с фосфатом кальция — соответственно 81 — 283—295 АЕ/мл (Р. Л. Джавакова, 1972).

Наряду с высокой антилетальной активностью сыворотки лошадей против яда гюрзы, полученные при иммунизации нативным ядом, обладают антигемолитичеcкой, антикоагулирующей, антигиалуронидазной активностью, в то время как сыворотки продуцентов, иммунизированных анаядом, почти полностью лишены этих свойств (А. А. Погуда, 1971).

Сыворотка выпускается в очищенном виде. Б. А. Васильев (1962, 1965) провел сравнительную оценку различных технологических схем очистки противоядной антигюрза сыворотки и предложил использовать с этой целью метод, основанный на осаждении белков риванолом с последующим пептическим гидролизом и концентрацией их ацетоном.

А. А. Абидов с соавт. (1971), Л. Е. Иванова (1972) указывают, что при выпуске жидких препаратов рентабелен метод Диаферм-3, а при изготовлении сухих лучшие результаты дает один из вариантов метода Просдис.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202