Исследования в области особоопасных инфекций

Физические и химические методы разделения белков

По данным Ю. 3. Гендона (1958), антитоксин в нативных противоботулинических сыворотках типа А находился в основном в Т-фракции, незначительное количество — в гамма- и бета-фракциях.

Таким образом, изучение белкового состава иммунной сыворотки выявило, что лишь незначительная часть белков связана с антителами. Большая часть серопротеинов не отвечает за антитоксическую активность сыворотки и является балластом.

Для очистки и концентрации антитоксических сывороток от балластных белков были использованы физические и химические методы разделения их.

Из физических методов разделения белков производственное значение имел метод замораживания (О. Bujwid, 1897; В. И. Вашков и Н. А. Курочкина, 1943; С. Д. Роньжина, 1946).

Работами отечественных исследований еще в 1895 г. испытывалось влияние замораживания на качество сывороток. Так, Г. И. Горянский (1895), имея в виду необходимость рассылки лечебной сыворотки в северные районы, а также в средней части России в зимнее время, изучил влияние холода на качество сыворотки и отметил, что замерзание сыворотки не снижает титра антител.

Аналогичные данные получили В. Е. Архангельская (1941), И. В. Пронин (1943), Л. С. Оглоблина (1946).

Метод замораживания был использован при очистке и концентрации низкотитражной противодифтерийной сыворотки в Томском институте вакцин и сывороток С. Д. Роньжиной (1949). Он основан на том, что при действии низких температур в первую очередь замерзает водная фракция сывороток, в последнюю — фракция, наиболее насыщенная антитоксином. При оттаивании сыворотки тает в первую очередь фракция, богатая антитоксином. Отделяя последнюю фракцию декантацией и отбрасывая водную, очищают и концентрируют гипериммунную сыворотку. О. Bujwid (1897) наблюдал при этом увеличение титра в 2,5-3 раза, С. Д. Роньжина — в 4—5 раз.

Из методов фракционирования белков (нейтральными солями, органическими осадителями, разделение на ионообменных смолах) для очистки и концентрации антитоксических лечебных сывороток наибольшее применение получил солевой метод.

Были испытаны различные соли, однако производственное применение нашли немногие из них. Соединения алюминия (сульфат алюминия, гель гидроокиси, глинозем, каолин) с целью очистки и концентрации сывороток применили Н. Aronson (1893), S. Marshall, Н. Welker (1913), W. Hebei (1913), М. А. Ракузин (1916), D. Klobusitzky (1938) и др. Так, H. Aronson еще в 1893 г. установил, что прибавление к сыворотке сульфата алюминия и сернокислого аммония вызывало осаждение фракций белков, которые содержали весь антитоксин. Элюцию антитоксина из осадка автор проводил слабым раствором щелочи, а дальнейшую концентрацию антител — путем преципитации спиртом, сульфатом аммония или же при помощи высушивания маточной жидкости в вакууме при температуре 45°.

Для очистки антитоксических сывороток в качестве осадителя белков использовали также сернокислый натрий, магний, фосфат натрия и другие соли (I. Brunner, S. Pincus, 1907; R. Ношег, 1919; P. Howe, 1921; M. Konkey, 1924; П. Ашмарин, А. Пономарев, 1928; A. Butler, Н. Montgomery, 1932; В. И. Вашков, Н. А. Курочкина, 1943; А. В. Маркович, И. М. Хаустова, 1943; В. И. Вашков, 1945; A. Kibric, М. Blonstein, 1948 и др.).

L. Brieger, P. Ehrliich (1893) первыми показали возможность осаждения антитоксинов при 30%-ном насыщении сывороток сернокислым аммонием.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202