Исследования в области особоопасных инфекций

Сравнение токсинообразования на различных средах (продолжение)

Токсин Cl. septicum лабилен (И. А. Ларина, 3. М. Волкова, 1958; Н. Ф. Калиниченко с соавт., 1963; Л. А. Бергольцева с соавт., 1968), в связи с чем можно использовать его в производстве гипериммунной сыворотки не больше 2 недель с момента приготовления (М. А. Бычкова, 1973).

Для сохранения исходной активности токсина Л. А. Бергольцева с соавт. (1968) предлагают при фильтрации через стерилизующие пластины предварительно промывать их питательной средой, а для стабилизации свойств концентрировать сернокислым аммонием, полученную пленку токсина растворять в фильтрате культуры и фильтровать также через промытые бульонным фильтратом пластины. При таком способе приготовления концентрированный токсин, по данным авторов, сохраняет свою активность в течение полугода и более. И. А. Гроссман (1941) концентрировал токсин септического вибриона по методу Буавена.

Для культивирования микроба применялся бульон Мартена (A. Raphael, V. Frasey, 1915; Е. В. Глотова, 1934; Ф. А. Черткова с Соавт., 1952), бульон Поупе (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; Л. В. Борисова, 1961), бульон из кислотного гидролизата конского мяса (Л. А. Бер-гольцева с соавт., 1968), пептон-пептоные среды (Н. Ф. Калиниченко, Л. А; Бергольцева, 1961; Н. Ф. Калиниченко с соавт., 1963); казеиновые среды (A. Bernheimer, 1947; И. Н. Виноградова с соавт., 1956; 1958; И. А. Ларина, 3. М. Волкова, 1958; И. М. Хаустова, 1962). Сравнительный анализ токсинообразования на различных питательных средах позволил рекомендовать Н. Ф. Калиниченко и Л. А. Бергольцевой (1961) использовать пепсин-пептонный бульон, на котором получались токсины Cl. septicum в 300—400 Dlm/мл. М. А. Бычкова (1973) из трех использованных сред (Глузмана, Поупе и из панкреатического гидролизата казеина) отмечает наибольшее токсинообразование на среде из панкреатического гидролизата казеина (281 Dlm/мл вместо 220—230 на мясных-бульонах).

В качестве продуцента токсина эдематиенс из 4 типов возбудителей (А, В, С, Д), встречающихся в природе, используют для производства антигена различные штаммы типа А, в том числе 79, 277, 156 (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; О. И. Зимина, 1957, 1960; Г. П. Черкас, 1958;, Е. В. Власова с соавт., 1959; Н. П. Ефимова, 1969; С. В. Бирюкова, 1969; И. И. Гольбец с соавт., 1973).

Токсин Cl. oedematiens обладает сложной структурой. В его составе обнаружены летальный, некротический, гемолитический факторы, а также энзимы агрессии: лецитиназа, гиалуронидаза, фибриполизин, желатиназа (Ю. М. Макарэва- Тарасевич, 1934; Е. В. Глотова, 1935; Н. Я. Денисова, М. Д. Петренко, 1955; Scott с соавт., 1934; С. Оак1еу, 1943; К. И. Матвеев, Ю. Б. Волгин, 1966).

При использовании штамма 277 С. В. Бирюкова (1968), С. В. Бирюкова, Л. А. Бергольцева (1968) отмечают, что более токсигенным является гладкий вариант. При сравнении токсинообразования всех трех штаммов было выявлено, что самые сильные токсины дает Cl. oedematiens 79 (М. А. Бычкова, 1973).

Изучение возраста штамма, применяемого для производства антигена, показало 3. Н. Ходоровой и Е. И. Шевченко- Саханевой (1955), что наилучшее токсинообразование дает 3 — 4-дневная культура (сравнивалась 1 — 12-дневная и 1 — 3 месячная). В настоящее время для посева используется освеженная культура 1—2—3- суточная (С. П. Заева, 1935; С. А. Зелевинская, 1956; Е. В. Власова с соавт., 1958; Е. В. Власова, 1959; С. В. Бирюкова, 1968). Работая со штаммом Cl. oedematiens 156, отобранным методом селекции, М. А. Бычкова (1973) рекомендует его применять в работе не более 4 месяцев хранения в замороженном при —10° состоянии, подвергая освежению перед засевом.

Длительность культивирования микроба определяется максимальной продукцией токсина и составляет от 2—5 суток, по данным О. А. Комковой (1946), Е. В. Власовой с соавт., (1958, 1959), О. И. Зиминой (1960) и до 6—7 суток (С. П. Заева, 1935; Е. В. Глотова, 1935; С. А. Зелевинская, 1943; В. Г. Кулак с соавт., 1969). По наблюдениям М. А. Бычковой (1973), длительность выращивания в какой-то мере связана с особенностями штамма: при культивировании Cl. oedematiens 79 на казеиновой среде с печеночным отваром максимальное токсинообразование наблюдалось к 7—8-му дню роста, у штамма же 156 — к 5—6-му дню. Для культивирования микроба применялись мясные среды, как-то: Мартена (Е. В. Глотова, 1934; С. П. Заева, 1935; С. А. Зелевинская, 1956, 1957, 1960), бульон Глузмана (3. Н. Ходорова, Е. И. Шевченко-Саханевой, 1955), пепсин-пептонный бульон (С. А. Зелевинская, 1943; О. А. Комкова, 1946; ,С. А. Зелевинская с соавт., 1955), бульон Поупе (3. Н, Ходорова, 1954). В настоящее время широко используются казеиновые среды из кислотного гидролизата (И. Н. Виноградова с соавт., 1956, 1958; В. Д. Никитин, 1965; К. А. Ахундова с соавт., 1966; Н. П. Ефимова, 1969; В. Г. Кулак с, соавт., 1969; B. Г. Кулак, 1972) пептического перевара (К. А. Ахундова с соавт., 1966) или смеси пепсинного и панкреатического гидролизатов казеина (М. Р. Нечаевская с соавт., 1967; C. В. Бирюкова, 1968; 1969; С. В. Бирюкова, Л. А. Бергольцева, 1968; И. И. Гольбец с соавт., 1973). При сравнении токсинообразования на казеиновых средах кислотного и пептического гидролизата более сильные токсины получали на пептических средах (К. А. Ахундова с соавт., 1966). Применялись рыбные среды из гидролизата рыбо-костной муки (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; Е. В. Власова с соавт., 1959), рыбо-казеиновые (И. Н. Виноградова с соавт., 1956, 1958).

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202