|
Сравнение токсинообразования на различных средах (продолжение)
Токсин Cl. septicum лабилен (И. А. Ларина, 3. М. Волкова, 1958; Н. Ф. Калиниченко с соавт., 1963; Л. А. Бергольцева с соавт., 1968), в связи с чем можно использовать его в производстве гипериммунной сыворотки не больше 2 недель с момента приготовления (М. А. Бычкова, 1973).
Для сохранения исходной активности токсина Л. А. Бергольцева с соавт. (1968) предлагают при фильтрации через стерилизующие пластины предварительно промывать их питательной средой, а для стабилизации свойств концентрировать сернокислым аммонием, полученную пленку токсина растворять в фильтрате культуры и фильтровать также через промытые бульонным фильтратом пластины. При таком способе приготовления концентрированный токсин, по данным авторов, сохраняет свою активность в течение полугода и более. И. А. Гроссман (1941) концентрировал токсин септического вибриона по методу Буавена.
Для культивирования микроба применялся бульон Мартена (A. Raphael, V. Frasey, 1915; Е. В. Глотова, 1934; Ф. А. Черткова с Соавт., 1952), бульон Поупе (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; Л. В. Борисова, 1961), бульон из кислотного гидролизата конского мяса (Л. А. Бер-гольцева с соавт., 1968), пептон-пептоные среды (Н. Ф. Калиниченко, Л. А; Бергольцева, 1961; Н. Ф. Калиниченко с соавт., 1963); казеиновые среды (A. Bernheimer, 1947; И. Н. Виноградова с соавт., 1956; 1958; И. А. Ларина, 3. М. Волкова, 1958; И. М. Хаустова, 1962). Сравнительный анализ токсинообразования на различных питательных средах позволил рекомендовать Н. Ф. Калиниченко и Л. А. Бергольцевой (1961) использовать пепсин-пептонный бульон, на котором получались токсины Cl. septicum в 300—400 Dlm/мл. М. А. Бычкова (1973) из трех использованных сред (Глузмана, Поупе и из панкреатического гидролизата казеина) отмечает наибольшее токсинообразование на среде из панкреатического гидролизата казеина (281 Dlm/мл вместо 220—230 на мясных-бульонах).
В качестве продуцента токсина эдематиенс из 4 типов возбудителей (А, В, С, Д), встречающихся в природе, используют для производства антигена различные штаммы типа А, в том числе 79, 277, 156 (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; О. И. Зимина, 1957, 1960; Г. П. Черкас, 1958;, Е. В. Власова с соавт., 1959; Н. П. Ефимова, 1969; С. В. Бирюкова, 1969; И. И. Гольбец с соавт., 1973).
Токсин Cl. oedematiens обладает сложной структурой. В его составе обнаружены летальный, некротический, гемолитический факторы, а также энзимы агрессии: лецитиназа, гиалуронидаза, фибриполизин, желатиназа (Ю. М. Макарэва- Тарасевич, 1934; Е. В. Глотова, 1935; Н. Я. Денисова, М. Д. Петренко, 1955; Scott с соавт., 1934; С. Оак1еу, 1943; К. И. Матвеев, Ю. Б. Волгин, 1966).
При использовании штамма 277 С. В. Бирюкова (1968), С. В. Бирюкова, Л. А. Бергольцева (1968) отмечают, что более токсигенным является гладкий вариант. При сравнении токсинообразования всех трех штаммов было выявлено, что самые сильные токсины дает Cl. oedematiens 79 (М. А. Бычкова, 1973).
Изучение возраста штамма, применяемого для производства антигена, показало 3. Н. Ходоровой и Е. И. Шевченко- Саханевой (1955), что наилучшее токсинообразование дает 3 — 4-дневная культура (сравнивалась 1 — 12-дневная и 1 — 3 месячная). В настоящее время для посева используется освеженная культура 1—2—3- суточная (С. П. Заева, 1935;
С. А. Зелевинская, 1956; Е. В. Власова с соавт., 1958; Е. В. Власова, 1959; С. В. Бирюкова, 1968). Работая со штаммом Cl. oedematiens 156, отобранным методом селекции, М. А. Бычкова (1973) рекомендует его применять в работе не более 4 месяцев хранения в замороженном при —10° состоянии, подвергая освежению перед засевом.
Длительность культивирования микроба определяется максимальной продукцией токсина и составляет от 2—5 суток, по данным О. А. Комковой (1946), Е. В. Власовой с соавт., (1958, 1959), О. И. Зиминой (1960) и до 6—7 суток (С. П. Заева, 1935; Е. В. Глотова, 1935; С. А. Зелевинская, 1943; В. Г. Кулак с соавт., 1969). По наблюдениям М. А. Бычковой
(1973), длительность выращивания в какой-то мере связана с особенностями штамма: при культивировании Cl. oedematiens 79 на казеиновой среде с печеночным отваром максимальное токсинообразование наблюдалось к 7—8-му дню роста, у штамма же 156 — к 5—6-му дню. Для культивирования микроба применялись мясные среды, как-то: Мартена (Е. В. Глотова, 1934; С. П. Заева, 1935; С. А. Зелевинская, 1956, 1957, 1960), бульон Глузмана (3. Н. Ходорова, Е. И. Шевченко-Саханевой, 1955), пепсин-пептонный бульон (С. А. Зелевинская, 1943; О. А. Комкова, 1946; ,С. А. Зелевинская с соавт., 1955), бульон Поупе (3. Н, Ходорова, 1954). В настоящее время широко используются казеиновые среды из кислотного гидролизата (И. Н. Виноградова с соавт., 1956, 1958; В. Д. Никитин, 1965; К. А. Ахундова с соавт., 1966; Н. П. Ефимова, 1969; В. Г. Кулак с, соавт., 1969; B. Г. Кулак, 1972) пептического перевара (К. А. Ахундова с соавт., 1966) или смеси пепсинного и панкреатического гидролизатов казеина (М. Р. Нечаевская с соавт., 1967; C. В. Бирюкова, 1968; 1969; С. В. Бирюкова, Л. А. Бергольцева, 1968; И. И. Гольбец с соавт., 1973). При сравнении токсинообразования на казеиновых средах кислотного и пептического гидролизата более сильные токсины получали на пептических средах (К. А. Ахундова с соавт., 1966). Применялись рыбные среды из гидролизата рыбо-костной муки (С. А. Зелевинская с соавт., 1955; Е. В. Власова с соавт., 1959), рыбо-казеиновые (И. Н. Виноградова с соавт., 1956, 1958). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|