Исследования в области особоопасных инфекций

Фракционирование белков комбинированным действием нейтральных солей и охлажденным спиртом

Интересен способ очистки и концентрации сывороток, предложенный A. Harms (1946). Он основан на фракционировании белков комбинированным действием нейтральных солей и 1%-ного раствора трикрезола или 2%-ного раствора фенола. В этих условиях фракционирования при более низких концентрациях сернокислого аммония высаливаются альбумины; при повышении концентрации этой соли — белки глобулиновой фракции. Вместе с альбуминами удаляются также пигменты сывороток, что способствует улучшению физических свойств очищенных препаратов.

Одновременно с солевыми методами очистки разрабатывались и другие, также основанные на выделении антитоксина в нативном виде. Так, еще I. Mellanby, G. Student (1908) фракционировали иммунные сыворотки охлажденным спиртом. Авторы не получили высокоочищенных препаратов, но установили факт резистентности сывороточных белков к воздействию спирта при низких температурах.

Попытки выделения антитоксина с помощью спирта, эфира, ацетона применялись многими авторами (М. Vila, 1922; М. Merril, М. Fleisher, 1932; А. И. Быстренин, 1939; Н. А. Пономарева, А. М. Дурасова, 1954; Н. А. Пономарева с соавт., 1956; М. Н. Дурасова, И. Д. Лоран, 1958).

A. Foroell, F. Johson (1948), R. Wittier, L. Pillemer (1949) показали и преимущество этого метода: антитоксические сыворотки, очищенлые при помощи спирта, лишены пирогенных свойств.

Однако следует указать, что спиртовые методы не нашли применения в практике очистки антитоксических сывороток из-за сравнительно высоких сенсибилизирующих свойств препаратов (М. Н. Дурасова, И. Д. Лоран, 1958; I. Delasel, Н. Chamsy, 1953).

Рассмотренные методы очистки и концентрации гетерогенных сывороток физическими и химическими методами проводились без нарушения строения иммунного глобулина.

Применение препаратов, очищенных и концентрированных солевым методом, электродиализом, комбинированным диализом, показало их преимущество по сравнению с неочищенными сыворотками, что выразилось в сокращении числа тяжелых форм сывороточной болезни. Однако частота ее уменьшилась незначительно (Б. А. Эгиз, В. А. Колли, 1913; Е. X. Ганюшина, Р. 3. Шерман, 1936; А. А. Колтыпин, 1937; А. В. Власова, 1938; Д. X. Зибицкер, 1939; А. К. Менделевич, 1941; А. В. Маркович, 1949 и др.). Это обусловлено тем, что фракции, с которыми связан иммунный глобулин, обладают высокими антигенными и анафилактогенными свойствами (С. Н. Предтеченский, 1916; W. Ruppel, 1923; R. Otto, К. Iwanofi, 1928; Н. А. Курочкина, 1952; А. А. Колчурина, 1959 и др.).

Так, по данным W. Ruppel (1923), по антигенности фракции белков можно расположить в следующем порядке: эйглобулины, псевдоглобулины, альбумины, а по степени анафилактогенности — бета-, гамма-, альфа-глобулины, затем альбумины (О. Г. Анджапаридзе, 1960). И. И. Райхер с соавт. (1962) подтвердили для лошадиных сывороток наибольшую анафилактогенность бета-, и гамма- глобулинов, то есть фракций, с которыми связана основная масса антител.

В связи с этим обстоятельством снижение реактогенности сывороточных препаратов могло быть осуществлено только при принципиально новом подходе к вопросу очистки и концентрации сывороток. И такой подход был найден. Он предусматривал наряду с высокой степенью очистки сывороток от балластных белков расщепление их иммуноглобулина с помощью протеолитических ферментов.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202