|
Фракционирование белков комбинированным действием нейтральных солей и охлажденным спиртом
Интересен способ очистки и концентрации сывороток, предложенный A. Harms (1946). Он основан на фракционировании белков комбинированным действием нейтральных солей и 1%-ного раствора трикрезола или 2%-ного раствора фенола. В этих условиях фракционирования при более низких концентрациях сернокислого аммония высаливаются альбумины; при повышении концентрации этой соли — белки глобулиновой фракции. Вместе с альбуминами удаляются также пигменты сывороток, что способствует улучшению физических свойств очищенных препаратов.
Одновременно с солевыми методами очистки разрабатывались и другие, также основанные на выделении антитоксина в нативном виде. Так, еще I. Mellanby, G. Student (1908) фракционировали иммунные сыворотки охлажденным спиртом. Авторы не получили высокоочищенных препаратов, но установили факт резистентности сывороточных белков к воздействию спирта при низких температурах.
Попытки выделения антитоксина с помощью спирта, эфира, ацетона применялись многими авторами (М. Vila, 1922; М. Merril, М. Fleisher, 1932; А. И. Быстренин, 1939; Н. А. Пономарева, А. М. Дурасова, 1954; Н. А. Пономарева с соавт., 1956; М. Н. Дурасова, И. Д. Лоран, 1958).
A. Foroell, F. Johson (1948), R. Wittier, L. Pillemer (1949) показали и преимущество этого метода: антитоксические сыворотки, очищенлые при помощи спирта, лишены пирогенных свойств.
Однако следует указать, что спиртовые методы не нашли применения в практике очистки антитоксических сывороток из-за сравнительно высоких сенсибилизирующих свойств препаратов (М. Н. Дурасова, И. Д. Лоран, 1958; I. Delasel, Н. Chamsy, 1953).
Рассмотренные методы очистки и концентрации гетерогенных сывороток физическими и химическими методами проводились без нарушения строения иммунного глобулина.
Применение препаратов, очищенных и концентрированных солевым методом, электродиализом, комбинированным диализом, показало их преимущество по сравнению с неочищенными сыворотками, что выразилось в сокращении числа тяжелых форм сывороточной болезни. Однако частота ее уменьшилась незначительно (Б. А. Эгиз, В. А. Колли, 1913; Е. X. Ганюшина, Р. 3. Шерман, 1936; А. А. Колтыпин, 1937; А. В. Власова, 1938; Д. X. Зибицкер, 1939; А. К. Менделевич, 1941; А. В. Маркович, 1949 и др.). Это обусловлено тем, что фракции, с которыми связан иммунный глобулин, обладают высокими антигенными и анафилактогенными свойствами (С. Н. Предтеченский, 1916; W. Ruppel, 1923; R. Otto, К. Iwanofi, 1928; Н. А. Курочкина, 1952; А. А. Колчурина, 1959 и др.).
Так, по данным W. Ruppel (1923), по антигенности фракции белков можно расположить в следующем порядке: эйглобулины, псевдоглобулины, альбумины, а по степени анафилактогенности — бета-, гамма-, альфа-глобулины, затем альбумины (О. Г. Анджапаридзе, 1960). И. И. Райхер с соавт. (1962) подтвердили для лошадиных сывороток наибольшую анафилактогенность бета-, и гамма- глобулинов, то есть фракций, с которыми связана основная масса антител.
В связи с этим обстоятельством снижение реактогенности сывороточных препаратов могло быть осуществлено только при принципиально новом подходе к вопросу очистки и концентрации сывороток. И такой подход был найден. Он предусматривал наряду с высокой степенью очистки сывороток от балластных белков расщепление их иммуноглобулина с помощью протеолитических ферментов. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|