|
Эфирно-спиртовый метод
R. Kekwick с соавт. (1946) разработали эфирно-спиртовый метод, обеспечивающий фракционирование плазмы с выделение гамма-глобулина и альбумина, при помощи изменения температуры, pH, ионной силы и концентрации эфира. Однако указанный метод также не нашел практического применения из-за огнеопасности и токсичности получаемых фракций.
Наибольшее распространение имеет этаноловый метод осаждения. Этиловый спирт как осадитель был использован еще в 1908 г. S. Mellanby, который показал, что 15—25%-ная его концентрация при температуре +2° позволяет выделить часть белков из лошадиной сыворотки с сохранением биологически активных свойств. Возможность использования этилового спирта для осаждения сывороточных белков при низкой температуре была показана рядом исследователей (L. Felton, 1931; 1932; В. Chou, N. Golbel, 1935; Е. Cohn с соавт., 1940, 1944), которым удалось получить 6 фракций: фракция 1 — фибринолизин, 2+3 — гамма-глобулин с примесью бета-фракции, 4 — альфа- и бета-глобулины, 5 — альбумин, 6 — следы альфа-, бета-глобулинов и альбумина. В 1946 г. Е. Cohn с соавт. усовершенствовали процесс фракционирования плазмы и сыворотки, разработав вариант, названный методом 6, для получения альбумина, фибриногена, тромбина и гамма-глобулина. Дальнейшее исследование, проведенное I. Oncley с соавт., (1949), завершилось предложением нового метода фракционирования белков плазмы — это метод 9. Исходным материалом служит фракция 2 + 3, которая получается по методу Кона (6-й метод). Метод 9 с различными модификациями используется в настоящее время при производстве гамма-глобулина в разных странах.
В Советском Союзе впервые фракционирование белков сыворотки было начато в Москве в 1946 г. в Городском институте эпидемиологии и микробиологии Н. В. Холчевым и Л. И. Колесниковой (1947). Одновременно в Московском институте вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова Г. А. Пискуновой и С. Пожарской (1947) также проводились подобные наблюдения. В основу технологии оба института положили принцип Кона. Позднее эти технологические методы были объединены в одном регламенте по изготовлению, контролю и применению гамма-глобулина, утвержденном 28 декабря 1954 г. Президиумом ученого совета Минздрава СССР, один как вариант А, другой — Б.
Далее (на следующей 75 странице) приводится производственная схема фракционирования плацентарной сыворотки при получении гамма-глобулина по варианту Б, которая применяется и до настоящего времени.
Метод фракционирования белков сыворотки (вариант Б) в дальнейшем был усовершенствован сотрудниками Томского института вакцин и сывороток (Н. Б. Плахова, В. Г. Механикова, А. И. Деева, 1960; Н. Б. Плахова, А. И. Деева, 1965) применительно к гипериммунным сывороткам лошадей. Авторы установили, что оптимальными условиями для более полного выделения общих глобулинов из сыворотки является pH 6,4, разведение их в тройном объеме физиологического раствора. Это позволило значительно повысить выход гамма-глобулина без снижения специфической активности препарата. Данная методика в литературе получила название «вариант Томского НИИВС». 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|