Исследования в области особоопасных инфекций

Эфирно-спиртовый метод

R. Kekwick с соавт. (1946) разработали эфирно-спиртовый метод, обеспечивающий фракционирование плазмы с выделение гамма-глобулина и альбумина, при помощи изменения температуры, pH, ионной силы и концентрации эфира. Однако указанный метод также не нашел практического применения из-за огнеопасности и токсичности получаемых фракций.

Наибольшее распространение имеет этаноловый метод осаждения. Этиловый спирт как осадитель был использован еще в 1908 г. S. Mellanby, который показал, что 15—25%-ная его концентрация при температуре +2° позволяет выделить часть белков из лошадиной сыворотки с сохранением биологически активных свойств. Возможность использования этилового спирта для осаждения сывороточных белков при низкой температуре была показана рядом исследователей (L. Felton, 1931; 1932; В. Chou, N. Golbel, 1935; Е. Cohn с соавт., 1940, 1944), которым удалось получить 6 фракций: фракция 1 — фибринолизин, 2+3 — гамма-глобулин с примесью бета-фракции, 4 — альфа- и бета-глобулины, 5 — альбумин, 6 — следы альфа-, бета-глобулинов и альбумина. В 1946 г. Е. Cohn с соавт. усовершенствовали процесс фракционирования плазмы и сыворотки, разработав вариант, названный методом 6, для получения альбумина, фибриногена, тромбина и гамма-глобулина. Дальнейшее исследование, проведенное I. Oncley с соавт., (1949), завершилось предложением нового метода фракционирования белков плазмы — это метод 9. Исходным материалом служит фракция 2 + 3, которая получается по методу Кона (6-й метод). Метод 9 с различными модификациями используется в настоящее время при производстве гамма-глобулина в разных странах.

В Советском Союзе впервые фракционирование белков сыворотки было начато в Москве в 1946 г. в Городском институте эпидемиологии и микробиологии Н. В. Холчевым и Л. И. Колесниковой (1947). Одновременно в Московском институте вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова Г. А. Пискуновой и С. Пожарской (1947) также проводились подобные наблюдения. В основу технологии оба института положили принцип Кона. Позднее эти технологические методы были объединены в одном регламенте по изготовлению, контролю и применению гамма-глобулина, утвержденном 28 декабря 1954 г. Президиумом ученого совета Минздрава СССР, один как вариант А, другой — Б.

Далее (на следующей 75 странице) приводится производственная схема фракционирования плацентарной сыворотки при получении гамма-глобулина по варианту Б, которая применяется и до настоящего времени.

Метод фракционирования белков сыворотки (вариант Б) в дальнейшем был усовершенствован сотрудниками Томского института вакцин и сывороток (Н. Б. Плахова, В. Г. Механикова, А. И. Деева, 1960; Н. Б. Плахова, А. И. Деева, 1965) применительно к гипериммунным сывороткам лошадей. Авторы установили, что оптимальными условиями для более полного выделения общих глобулинов из сыворотки является pH 6,4, разведение их в тройном объеме физиологического раствора. Это позволило значительно повысить выход гамма-глобулина без снижения специфической активности препарата. Данная методика в литературе получила название «вариант Томского НИИВС».

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202