Исследования в области особоопасных инфекций

Выделение гамма-глобулина

В настоящее время среди мер, используемых для профилактики и лечения ряда инфекционных заболеваний, важное значение придается специфическим сывороточным препаратам. Однако, учитывая, что неочищенные сыворотки вызывают в организме больного тяжелые побочные реакции, уже давно ставился вопрос о возможности освобождения их от балластных белков. Изучение иммунных свойств белков показало, что антитела связаны с определенными фракциями, в то время как другие компоненты их, так же как и небелковые органические составные части сыворотки, являются неприемлемыми для организма больного ввиду увеличения возможности возникновения сывороточной болезни. С введением электрофоретического метода разделения сывороточных белков (A. Tiselius, 1937) появилось значительное число исследований, поовященных изучению иммунных свойств белков, входящих в состав сыворотки крови человека и животных.

Было установлено, что сывороточные белки состоят из четырех основных фракций: альбумина и трех видов глобулинов, названных автором альфа-, бета- и гамма-глобулинами. В иммунной сыворотке, по данным С. Wander с соавт. (1940—1941), появляется новый «белковый» компонент, названный ими Т-фракция, которая по электрофоретической подвижности располагается между гамма- и бета-глобулинами.

Схема технологического процесса современного сывороточного производства

Цитратная кровь+содо-солевой раствор
Сепарирование
Сгусток эритроцитов отбрасывается. Плазма + 0,25% фенола
Ферментолиз разведенной до 3% белка плазмы 2 ч при t 20—24°
Термоденатурация балластного белка с 14% (NH4)2SO4 при t 56° 45 мин, pH 4,3—4,33
Фильтрация через кассетные фильтры
Осадок отбрасывается. Высаливание иммунного глобулина при pH 7,0—7,1 и 34% (NH4)2SO4
Фильтрат отбрасывается. Осадок иммуноглобулина прессуется
Диализ иммунного глобулина до 0,1% (NH4)2SO4
Выделение балластных белков фосфатом алюминия. Выделение балластных белков. Насыщение раствора антитоксина хлороформом и подкисление
Осветление антитоксина на сепараторе АС2-ЗМ. Осветление антитоксина на сепараторах
Стандартизация. Стандартизация
Стерилизующая фильтрация. Стерилизующая фильтрация

Изучение иммунологической активности различных фракций белков сыворотки крови человека и животных явилось важным моментом при разработке методов очистки и концентрации лечебных препаратов. Ряд авторов (Е. Cohn с соавт., 1944; Е. Cohn, 1945; Н. Banton, D. Melford, 1950) в своих исследованиях показали высокую эффективность гамма-глобулина, выделенного из крови человека, который по иммунной активности намного превосходил исходные сыворотки. В гипериммунных антивирусных сыворотках животных также специфической активностью обладает гамма-глобулиновая и частично Т-глобулиновая фракции (I. Enders, 1944; С. Morgan, 1945; М. Opton с соавт., 1955; Н. А. Пономарева, С. Н. Бабаева и М. Н. Дурасова, 156; Ю. 3. Гендон, 1958; А. М. Юрковский и Ю. 3. Гендон, 1959; А. В. Бейлинсон, Н. Н. Орлова, К. Л. Шаханина, Г. А. Витохина, Г. В. Чистосердова и А. И. Львова, 1960).

Для выделения гамма-глобулина применялись различные методы фракционирования: солевой, спиртовый, эфирно-спиртовый, соли тяжелых металлов и в последнее время используются акридиновые основания (риванол).

Солевой метод осаждения, несмотря на быстроту и простоту технологии, не нашел практического применения ввиду возможности бактериальной загрязненности белкового раствора во время фракционирования и отсутствия гарантии удаления вируса гепатита при фракционировании сыворотки крови человека.

Ряд исследователей (Lutzeit, 1924; D. Surgenor с соавт., 1949; С. Tanford, 1952; F. Gurd, D. Goodman, 1952; I. Rejnek, F. Skvaril, 1957; 1959; D. Surgenor с соавт., 1960; H. В. Холчев и Л. И. Колесникова, 1959) проводили выделение сывороточных белков путем использования металлов: цинка, ртути, бария, алюминия, применяемых в виде солей. Авторы установили, что если металлы в различных комбинациях при определенной ионной силе, концентрации и pH среды обеспечивали выделение альбумина, бета- и гамма-глобулинов с сохранением их биологической активности, то удаление металлов осуществлялось адсорбцией на ионообменных смолах. Однако данный метод производственного применения не получил распространения ввиду неполного и неточного отделения фракций.

Из органических осадителей для фракционирования употребляли метиловый и этиловый спирты, ацетон, эфир. Фракционирование с помощью метилового спирта при температуре ниже нуля изучали на сыворотках животных S. Lei и Н. Wu (1934), а на экстрактах плацент — Fu-Tangehu, Chi-Yuan-Choy (1935), L. Pillemer, M. Hutchinson, (1945).

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202