|
Выделение гамма-глобулина
В настоящее время среди мер, используемых для профилактики и лечения ряда инфекционных заболеваний, важное значение придается специфическим сывороточным препаратам. Однако, учитывая, что неочищенные сыворотки вызывают в организме больного тяжелые побочные реакции, уже давно ставился вопрос о возможности освобождения их от балластных белков. Изучение иммунных свойств белков показало, что антитела связаны с определенными фракциями, в то время как другие компоненты их, так же как и небелковые органические составные части сыворотки, являются неприемлемыми для организма больного ввиду увеличения возможности возникновения сывороточной болезни. С введением электрофоретического метода разделения сывороточных белков (A. Tiselius, 1937) появилось значительное число исследований, поовященных изучению иммунных свойств белков, входящих в состав сыворотки крови человека и животных.
Было установлено, что сывороточные белки состоят из четырех основных фракций: альбумина и трех видов глобулинов, названных автором альфа-, бета- и гамма-глобулинами. В иммунной сыворотке, по данным С. Wander с соавт. (1940—1941), появляется новый «белковый» компонент, названный ими Т-фракция, которая по электрофоретической подвижности располагается между гамма- и бета-глобулинами.
Схема технологического процесса современного сывороточного производства
Цитратная кровь+содо-солевой раствор
Сепарирование
Сгусток эритроцитов отбрасывается. Плазма + 0,25% фенола
Ферментолиз разведенной до 3% белка плазмы 2 ч при t 20—24°
Термоденатурация балластного белка с 14% (NH4)2SO4 при t 56° 45 мин, pH 4,3—4,33
Фильтрация через кассетные фильтры
Осадок отбрасывается. Высаливание иммунного глобулина при pH 7,0—7,1 и 34% (NH4)2SO4
Фильтрат отбрасывается. Осадок иммуноглобулина прессуется
Диализ иммунного глобулина до 0,1% (NH4)2SO4
Выделение балластных белков фосфатом алюминия. Выделение балластных белков. Насыщение раствора антитоксина хлороформом и подкисление
Осветление антитоксина на сепараторе АС2-ЗМ. Осветление антитоксина на сепараторах
Стандартизация. Стандартизация
Стерилизующая фильтрация. Стерилизующая фильтрация
Изучение иммунологической активности различных фракций белков сыворотки крови человека и животных явилось важным моментом при разработке методов очистки и концентрации лечебных препаратов. Ряд авторов (Е. Cohn с соавт., 1944; Е. Cohn, 1945; Н. Banton, D. Melford, 1950) в своих исследованиях показали высокую эффективность гамма-глобулина, выделенного из крови человека, который по иммунной активности намного превосходил исходные сыворотки. В гипериммунных антивирусных сыворотках животных также специфической активностью обладает гамма-глобулиновая и частично Т-глобулиновая фракции (I. Enders, 1944; С. Morgan, 1945; М. Opton с соавт., 1955; Н. А. Пономарева, С. Н. Бабаева и М. Н. Дурасова, 156; Ю. 3. Гендон, 1958; А. М. Юрковский и Ю. 3. Гендон, 1959; А. В. Бейлинсон, Н. Н. Орлова, К. Л. Шаханина, Г. А. Витохина, Г. В. Чистосердова и А. И. Львова, 1960).
Для выделения гамма-глобулина применялись различные методы фракционирования: солевой, спиртовый, эфирно-спиртовый, соли тяжелых металлов и в последнее время используются акридиновые основания (риванол).
Солевой метод осаждения, несмотря на быстроту и простоту технологии, не нашел практического применения ввиду возможности бактериальной загрязненности белкового раствора во время фракционирования и отсутствия гарантии удаления вируса гепатита при фракционировании сыворотки крови человека.
Ряд исследователей (Lutzeit, 1924; D. Surgenor с соавт., 1949; С. Tanford, 1952; F. Gurd, D. Goodman, 1952; I. Rejnek, F. Skvaril, 1957; 1959; D. Surgenor с соавт., 1960; H. В. Холчев и Л. И. Колесникова, 1959) проводили выделение сывороточных белков путем использования металлов: цинка, ртути, бария, алюминия, применяемых в виде солей. Авторы установили, что если металлы в различных комбинациях при определенной ионной силе, концентрации и pH среды обеспечивали выделение альбумина, бета- и гамма-глобулинов с сохранением их биологической активности, то удаление металлов осуществлялось адсорбцией на ионообменных смолах. Однако данный метод производственного применения не получил распространения ввиду неполного и неточного отделения фракций.
Из органических осадителей для фракционирования употребляли метиловый и этиловый спирты, ацетон, эфир. Фракционирование с помощью метилового спирта при температуре ниже нуля изучали на сыворотках животных S. Lei и Н. Wu (1934), а на экстрактах плацент — Fu-Tangehu, Chi-Yuan-Choy (1935), L. Pillemer, M. Hutchinson, (1945). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|