|
Иммунные асциты
В последнее время в вирусологических лабораториях при постановке серологических реакций, наряду с получением специфических сывороток из крови животных, широко используются иммунные асциты, которые готовят путем предварительной иммунизации и последующего введения в брюшную полость белых мышей или белых крыс клеток злокачественных опухолей. Накоплен достаточно большой материал, указывающий на возможность успешного изготовления иммунных асцитов к энтеровирусам (G. Contreras с соавт. 1952; G. Dalldorf, G. Sickles, 1956), арбовирусам (D. Ganfog M. Kinsley, 1963; A. Sartorelli с соавт., 1966; E. Tikasingh с соавт., 1966; С. Я. Гайдамович с соавт., 1967; 1969; Л. Н. Тарасович, С. Я. Гайдамович, 1971), вирусам оспы (Р. А. Шафрикова, 1970; А. П. Степанова, 1973), лимфоцитарного хориоменингита (Л. Е. Подоплекина, 1975).
Для приготовления иммунных асцитов на белых мышах используются клетки саркомы 180 и 180Тg (A. Sartorelli с соавт., 1966; А. Л. Думина, 1969) или саркомы Эрлиха (S. Berkovich, 1962), а на белых крысах — клетки перевиваемой асцитной опухоли яичника крыс штамма ОЯ (А. Л. Думина, 1969).
Рекомендуется брать самок белых мышей весом 20—25 г. Вирусы пассируются на молодых белых мышах. На высоте заболевания извлекается мозг, готовится 10%-ная суспензия на физиологическом растворе и центрифугируется при 3000 об. в течение 15 минут. Надосадочная жидкость отсасывается и соединяется в равных объемах с адъювантом. В качестве последнего чаще всего рекомендуется использовать полный и неполный адъюванты Фрейнда, либо масляно-бактериальную смесь (МБС), состоящую из 9 частей вазелинового масла, 1 части ланолина и 1—2 мг/мл лиофилизированной вакцины БЦЖ (С. Я. Гайдамович с соавт., 1969). Хорошие результаты получены при применении адъювантов, состоящих из 3 частей вазелинового масла и 1 части ланолина либо из 9 частей арлацелла и 1 части вазелинового масла (Л. Е. Подоплекина, 1975).
Для иммунизации целесообразно использовать следующую схему введения материала:
1-й день. Суспензию (10%-ную) инфекционного мозга смешивают в равных объемах с полным адъювантом Фрейнда и вводят мышам по 0,2 мл внутрибрюшинно (дополнительные введения вируса могут быть сделаны с 7-дневным интервалом).
25-й день. Вводят каждому животному 0,1 мл асцитной жидкости Саркома 180Тg, которая берется непосредственно от мышей-доноров с асцитом. Через 10—15 дней после введения у мышей начинается накопление асцита.
31-й день. Та же инъекция, что и в 1-й день.
38-й день. В это время уже можно брать асцитную жидкость при помощи шприца объемом 10 мл и иглы диаметром 1,2 мм. В течение нескольких дней можно сделать 3—4 повторных взятия асцита от одного и того же животного. Если работа проводится с вирусами, патогенными для мышей при внутрибрюшинном заражении, за 7 дней до введения смеси вируса и адъюванта делают инъекцию инактивированного вируса (В. Хэммон и Г. Сатер, 1974).
Как показывает опыт многих исследователей (D. Gamle, М. Kinsley, 1966; С. Я. Гайдамович с соавт., 1967; 1969; A. Sartorelli с соавт., 1966; Л. Е. Подоплекина, 1975 и др.), титры специфических антител в иммунных асцитах не уступают таковым в сыворотках крови животных и колеблются в зависимости от схемы иммунизации и вида антитена в РПГА от 1:80 до 1:5120, в РСК от 1:40 до 1:640. Достаточно высокий уровень антител отмечается в отношении наличия вируснейтрализующих и преципитирующих антител.
Асцитическая жидкость выпускается в лиофилизированном виде в ампулах БЦЖ по 0,5 или 1,0 мл и хранится под вакуумом. Срок годности препарата — 2 года с момента выдачи контрольного номера при условии хранения при 4—6°С.
Иммунные асцитические жидкости используют в качестве эталонного препарата при типировании и идентификации соответствующих вирусов, а также служат контролем специфичности в диагностических, серологических реакциях. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|