Исследования в области особоопасных инфекций

Иммунные асциты

В последнее время в вирусологических лабораториях при постановке серологических реакций, наряду с получением специфических сывороток из крови животных, широко используются иммунные асциты, которые готовят путем предварительной иммунизации и последующего введения в брюшную полость белых мышей или белых крыс клеток злокачественных опухолей. Накоплен достаточно большой материал, указывающий на возможность успешного изготовления иммунных асцитов к энтеровирусам (G. Contreras с соавт. 1952; G. Dalldorf, G. Sickles, 1956), арбовирусам (D. Ganfog M. Kinsley, 1963; A. Sartorelli с соавт., 1966; E. Tikasingh с соавт., 1966; С. Я. Гайдамович с соавт., 1967; 1969; Л. Н. Тарасович, С. Я. Гайдамович, 1971), вирусам оспы (Р. А. Шафрикова, 1970; А. П. Степанова, 1973), лимфоцитарного хориоменингита (Л. Е. Подоплекина, 1975).

Для приготовления иммунных асцитов на белых мышах используются клетки саркомы 180 и 180Тg (A. Sartorelli с соавт., 1966; А. Л. Думина, 1969) или саркомы Эрлиха (S. Berkovich, 1962), а на белых крысах — клетки перевиваемой асцитной опухоли яичника крыс штамма ОЯ (А. Л. Думина, 1969).

Рекомендуется брать самок белых мышей весом 20—25 г. Вирусы пассируются на молодых белых мышах. На высоте заболевания извлекается мозг, готовится 10%-ная суспензия на физиологическом растворе и центрифугируется при 3000 об. в течение 15 минут. Надосадочная жидкость отсасывается и соединяется в равных объемах с адъювантом. В качестве последнего чаще всего рекомендуется использовать полный и неполный адъюванты Фрейнда, либо масляно-бактериальную смесь (МБС), состоящую из 9 частей вазелинового масла, 1 части ланолина и 1—2 мг/мл лиофилизированной вакцины БЦЖ (С. Я. Гайдамович с соавт., 1969). Хорошие результаты получены при применении адъювантов, состоящих из 3 частей вазелинового масла и 1 части ланолина либо из 9 частей арлацелла и 1 части вазелинового масла (Л. Е. Подоплекина, 1975).

Для иммунизации целесообразно использовать следующую схему введения материала:

1-й день. Суспензию (10%-ную) инфекционного мозга смешивают в равных объемах с полным адъювантом Фрейнда и вводят мышам по 0,2 мл внутрибрюшинно (дополнительные введения вируса могут быть сделаны с 7-дневным интервалом).

25-й день. Вводят каждому животному 0,1 мл асцитной жидкости Саркома 180Тg, которая берется непосредственно от мышей-доноров с асцитом. Через 10—15 дней после введения у мышей начинается накопление асцита.

31-й день. Та же инъекция, что и в 1-й день.

38-й день. В это время уже можно брать асцитную жидкость при помощи шприца объемом 10 мл и иглы диаметром 1,2 мм. В течение нескольких дней можно сделать 3—4 повторных взятия асцита от одного и того же животного. Если работа проводится с вирусами, патогенными для мышей при внутрибрюшинном заражении, за 7 дней до введения смеси вируса и адъюванта делают инъекцию инактивированного вируса (В. Хэммон и Г. Сатер, 1974).

Как показывает опыт многих исследователей (D. Gamle, М. Kinsley, 1966; С. Я. Гайдамович с соавт., 1967; 1969; A. Sartorelli с соавт., 1966; Л. Е. Подоплекина, 1975 и др.), титры специфических антител в иммунных асцитах не уступают таковым в сыворотках крови животных и колеблются в зависимости от схемы иммунизации и вица антитена в РПГА от 1:80 до 1:5120, в РСК от 1:40 до 1:640. Достаточно высокий уровень антител отмечается в отношении наличия вируснейтрализующих и преципитирующих антител.

Асцитическая жидкость выпускается в лиофилизированном виде в ампулах БЦЖ по 0,5 или 1,0 мл и хранится под вакуумом. Срок годности препарата — 2 года с момента выдачи контрольного номера при условии хранения при 4—6°С.

Иммунные асцитические жидкости используют в качестве эталонного препарата при типировании и идентификации соответствующих вирусов, а также служат контролем специфичности в диагностических, серологических реакциях.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202