|
Хранение маточных культур
Маточные культуры можно хранить на полужидкой среде Тароцци под маслом при 2-4°, при этом В. Б. Фрейман, К. А. Ахундова и В. Д. Артеменко (1972) перед посевом за сутки ее освежали.
Методом селекции можно повысить качество посевного материала. Дело в том, что особи, выделенные из отдельных колоний Cl. botulinum, могут обладать различными токсигенными свойствами и продуцировать токсины различной активности (М. X. Колесникова, 1937; А. Е. Бурова, Ф. Т. Кац, 1941; К. И. Матвеев, 1959; Е. В. Перова, 1970).
В Томском НИИВС (Г. Е. Синельников, 1972; С. А. Соловьева, 1972; Г. Е. Синельников, С. А. Соловьева, С. М. Прегер, 1973) проводилось выделение колоний Cl. botulinum типов А, В, Е с трубок Веньяль-Вейона. Была подтверждена различная токсигенность и антигенность отдельных колоний. Засев питательных сред штаммами, полученными из наиболее токсигенных колоний, позволяет готовить токсины высокой активности.
Форма диссоциации, по большинству авторов, не связана с токсигенными свойствами культуры (Г. М. Френкель, 1943; С. Dolman, 1957; 1960; К. И. Матвеев, 1959; Е. В. Перова, 1970). Лишь единичные авторы выявляли зависимость токсичности от формы диссоциации. Так, М. Л. Матяш, С. П. Аскалонов (1941), И. А. Ларина (1950) отмечали, что токсичность шероховатых, на агаре Цейслера, колоний в 10 раз больше, чем гладких для Cl. botulinum типа А.
При производстве ботулинических антигенов определенное внимание уделяется возрасту посевной культуры.
Но следует указать, что по этому вопросу нет единого мнения. К. Lewis, Е. Hill (1947) использовали для получения токсина типа А свежую культуру.
А. А. Воробьев с соавт. (1962) для производства ботулинического токсина типа Е применили культуру штамма 188-20 годичной давности, сохраняя ее при комнатной температуре или при 5—10° в темном месте.
М. И. Ройтман (1970) нашел, что наиболее активные токсины типа С могут быть получены при посевах культуры, выдержанной при 4° в течение 4—6 месяцев без пересевов.
Е. Райчева и Н. Марчев (1966) использовали культуру Cl. botulinum типов С, Д, Е не моложе 6 месяцев, однако перед посевом они рекомендуют освежать ее в течение 72 часов на пробирках, содержащих телячий бульон с кусочками мяса, 0,5% глюкозы и 0,1% агара.
В Томском институте вакцин и сывороток для выяснения влияния возраста культуры на токсигенные и антигенные свойства получаемых токсинов проведены наблюдения за производственными штаммами типов А 363, В 364, Е 341, и 503 (Г. Е. Синельников, С. А. Соловьева, Т. В. Майорова, С. М. Прегер, 1975). Было показано, что возраст применяемой культуры от 7 суток до 9 месяцев хранения для типов А и В и до 12 месяцев для типа Е (сроки наблюдения) не влияет на качество получаемых токсинов.
С целью приготовления ботулинических антигенов применяют различные питательные среды, богатые белковыми субстратами: мясные, рыбные, казеиновые и их сочетания.
Широкое распространение при производстве ботулинических антигенов типов А и В для гипериммунизации получила мясные среды, как-то: бульон Глузмана, печеночный бульон.
С. А. Зелевинская и 3. М. Волкова (1935), К. И. Матвеев, Т. И. Булатова (1959) применили пепсин-пептонную среду.
По данным A. Prevot, Е. Brygoo (1953), лучшей средой для производства токсина типа А является бульон Вейнбергас 1% глюкозы. На этой среде активность токсинов в среднем достигала 400000 Dlm/мл для морской свинки. К. И. Матвеев, А. Т. Кравченко (1959), А. А. Воробьев с соавт., (1961) , И. С. Корнев с соавт. (1963) и др. получали высококачественные токсины типов А и В силой до 2 млн.Dlm/мл на рыбно-кукурузной среде, имевшей в своей основе соляно-кислый гидролизат рыбной и кукурузной муки. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|