|
Просдис — протеолиз, сорбция, диализ, сорбция
В Ташкентском институте вакцин и сывороток авторским коллективом под руководством Н. И. Синяшина был создан метод Просдис — протеолиз сорбция, диализ, сорбция (Н. И. Синяшин, Л. Г. Лисоченко, 1968; Л, Г. Лисоченко, 1968; Н. И. Синяшин с соавт., 1972). Вариант метода — Просдис-2 был утвержден в виде дополнения к регламенту производства противостолбнячной сыворотки 28 мая 1970 г.
Очистка и концентрация сывороток методом Просдис-2 состоит из нескольких этапов:
1. Связывание альбуминов и альфа-глобулинов при pH 3,68—3,75 с последующей (через 20 минут) нейтрализацией до pH 4,18—4,22, при этом образуется нерастворимый комплекс алюминия с альбумином и альфа-глобулином.
2. Неполный протеолиз пепсином оставшихся в растворе глобулинов при pH 3,6—3,65, температуре 20—22° в течение 18 часов.
3. Осаждение балластных белков в комплексе с алюминием при pH 5,6—5,7 и отфильтровывание их.
4. Термокоагуляция лабильных продуктов протеолиза и отфильтровывание их. Для чего в фильтрате создают pH 4,3, добавляют 14% сернокислого аммония, прогревают 1 час при 56°, образующийся осадок отфильтровывают.
5. Высаливание иммунных глобулинов сернокислым аммонием (34%-ная концентрация, pH 6,9—7,1) и их диализ.
6. Сепарирование, стандартизация и стерилизующая фильтрация.
Авторы метода (Н. И. Синяшин, Л. Г. Лисоченко, 1968; Л. Г. Лисоченко, 1968) изучили свойства очищенных Просдис сывороток и установили, что после внутримышечного введения они быстрее всасываются, и антитоксин появляется в токе крови в большем титре, чем сыворотки, полученные с помощью Диаферм-3. По анафилактогенным и авидным свойствам статистически значимых различий не выявлено. Следует, однако, указать, что в опыте иммунопреципитации в агаре с токсином-анатоксином сыворотки Диаферм-3 давали 3 линии преципитации, Просдис — 2 линии.
Было показано, что сыворотки более очищены, содержат меньше холестерина, меньше сульфгидрильных групп, а также сохраняют свои физико-химические свойства (Л. Г. Лисоченко с соавт., 1970). По данным Н. И. Синяшина, Л. Г. Лисоченко, Л. Е. Ивановой (1972), они также дают больший выход.
Лучшую очистку сывороток Просдис-2 и больший коэффициент концентрации подтверждают многие авторы, испытавшие этот метод на различных видах сывороток (М. В. Ярунцева, 1971; А. М. Борзунина с соавт., 1971; Н. X. Музафарова, Г. Е. Синельников, О. В. Кулешова, С. М. Прегер и др., 1972; М. В. Ярунцева, С. М. Прегер, О. В. Кулешова, 1972; В. И. Трубицина с соавт., 1972; В. М. Роменский с соавт., 1973; С. М. Прегер, Н. X. Музафарова, Г. Е. Синельников, С. С. Козыренко, 1973). Однако, по данным многих вышеперечисленных авторов, сыворотки Просдис дают меньший выход.
В отношении стабильности титра антител выводы противоречивы. По данным Л. Г. Лисоченко с соавт., (1970), в течение 2 лет наблюдения сыворотки Просдис были практически стабильны (из 6 серий у одной титр снизился на 100 ME), по данным М. В. Ярунцевой и Р. Б. Васильченко (1972), сыворотки после 6 месяцев хранения снизили достоверно титр.
В Уфимском НИИВС (Ю. А. Хавкин, Т. А. Баталова, 1968; Т. А. Баталова, 1971; Ю. А. Хавкин, 1972; Ю. А. Хавкин с соавт., 1972) был разработан бессолевой метод очистки антитоксических сывороток Ультраферм. Основной особенностью метода Ультраферм является полный отказ от солевого осаждения и диализа. Процесс состоит из осаждения балластных белков (фибриногена, основной массы альбумина и звглобулина) риванолом, протеолиза в присутствии риванола, освобождения от балластных белков и риванола с помощью адсорбции на активированном угле и гидроокиси алюминия и концентрации ультрафильтрацией. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|