Исследования в области особоопасных инфекций

Просдис — протеолиз, сорбция, диализ, сорбция

В Ташкентском институте вакцин и сывороток авторским коллективом под руководством Н. И. Синяшина был создан метод Просдис — протеолиз сорбция, диализ, сорбция (Н. И. Синяшин, Л. Г. Лисоченко, 1968; Л, Г. Лисоченко, 1968; Н. И. Синяшин с соавт., 1972). Вариант метода — Просдис-2 был утвержден в виде дополнения к регламенту производства противостолбнячной сыворотки 28 мая 1970 г.

Очистка и концентрация сывороток методом Просдис-2 состоит из нескольких этапов:
1. Связывание альбуминов и альфа-глобулинов при pH 3,68—3,75 с последующей (через 20 минут) нейтрализацией до pH 4,18—4,22, при этом образуется нерастворимый комплекс алюминия с альбумином и альфа-глобулином.
2. Неполный протеолиз пепсином оставшихся в растворе глобулинов при pH 3,6—3,65, температуре 20—22° в течение 18 часов.
3. Осаждение балластных белков в комплексе с алюминием при pH 5,6—5,7 и отфильтровывание их.
4. Термокоагуляция лабильных продуктов протеолиза и отфильтровывание их. Для чего в фильтрате создают pH 4,3, добавляют 14% сернокислого аммония, прогревают 1 час при 56°, образующийся осадок отфильтровывают.
5. Высаливание иммунных глобулинов сернокислым аммонием (34%-ная концентрация, pH 6,9—7,1) и их диализ.
6. Сепарирование, стандартизация и стерилизующая фильтрация.

Авторы метода (Н. И. Синяшин, Л. Г. Лисоченко, 1968; Л. Г. Лисоченко, 1968) изучили свойства очищенных Просдис сывороток и установили, что после внутримышечного введения они быстрее всасываются, и антитоксин появляется в токе крови в большем титре, чем сыворотки, полученные с помощью Диаферм-3. По анафилактогенным и авидным свойствам статистически значимых различий не выявлено. Следует, однако, указать, что в опыте иммунопреципитации в агаре с токсином-анатоксином сыворотки Диаферм-3 давали 3 линии преципитации, Просдис — 2 линии.

Было показано, что сыворотки более очищены, содержат меньше холестерина, меньше сульфгидрильных групп, а также сохраняют свои физико-химические свойства (Л. Г. Лисоченко с соавт., 1970). По данным Н. И. Синяшина, Л. Г. Лисоченко, Л. Е. Ивановой (1972), они также дают больший выход.

Лучшую очистку сывороток Просдис-2 и больший коэффициент концентрации подтверждают многие авторы, испытавшие этот метод на различных видах сывороток (М. В. Ярунцева, 1971; А. М. Борзунина с соавт., 1971; Н. X. Музафарова, Г. Е. Синельников, О. В. Кулешова, С. М. Прегер и др., 1972; М. В. Ярунцева, С. М. Прегер, О. В. Кулешова, 1972; В. И. Трубицина с соавт., 1972; В. М. Роменский с соавт., 1973; С. М. Прегер, Н. X. Музафарова, Г. Е. Синельников, С. С. Козыренко, 1973). Однако, по данным многих вышеперечисленных авторов, сыворотки Просдис дают меньший выход.

В отношении стабильности титра антител выводы противоречивы. По данным Л. Г. Лисоченко с соавт., (1970), в течение 2 лет наблюдения сыворотки Просдис были практически стабильны (из 6 серий у одной титр снизился на 100 ME), по данным М. В. Ярунцевой и Р. Б. Васильченко (1972), сыворотки после 6 месяцев хранения снизили достоверно титр.

В Уфимском НИИВС (Ю. А. Хавкин, Т. А. Баталова, 1968; Т. А. Баталова, 1971; Ю. А. Хавкин, 1972; Ю. А. Хавкин с соавт., 1972) был разработан бессолевой метод очистки антитоксических сывороток Ультраферм. Основной особенностью метода Ультраферм является полный отказ от солевого осаждения и диализа. Процесс состоит из осаждения балластных белков (фибриногена, основной массы альбумина и звглобулина) риванолом, протеолиза в присутствии риванола, освобождения от балластных белков и риванола с помощью адсорбции на активированном угле и гидроокиси алюминия и концентрации ультрафильтрацией.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202