Исследования в области особоопасных инфекций

Схема Ю.В. Федорова

В настоящее время в практике производства сыворотки против клещевого энцефалита используют схему, разработанную Ю. В. Федоровым, 1966. В качестве антигена применяют либо 10%-ную вируссодержащую суспензию мозга белых мышей, либо антиген из вируса, репродуцированного в культуре клеток эмбриона курицы. Иммунизация мозговым антигеном производится подкожно или внутримышечно, культуральный антиген вводится, как указано выше, одновременно внутримышечно и внутривенно. Интервалы между инъекциями составляют в первые 3 цикла 6—7 дней. Последующие циклы иммунизации содержат 2—3-кратное введение антигена в дозе 20—60 мл с интервалами в 4—5 дней. Кровопускания производятся на 7—8-й день после последней инъекции вируса. Интервалы между циклами не превышают 14 дней.

Попытки получить очищенную сыворотку были предприняты в 1941 г., когда Е. Н. Левкович и Н. В. Катан испытали метод диализа и пришли к заключению, что очищенная сыворотка обладает большей специфической активностью, чем нативная. Позже были проведены исследования (О. Г. Анджапаридзе с соавт., (1956) по очистке и концентрации противоэнцефалитной сыворотки методом водного диализа, но авторы пришли к выводу о невозможности получения препарата, однородного по белковому составу. Неудовлетворительные результаты были получены и при очистке и концентрации нативной сыворотки методом ферментативного гидролиза.

Первые успешные исследования в этом направлении предприняты в Томском институте вакцин и сывороток С. М. Прегер и М. А. Автономовой (1956). Применив метод пептического перевара, авторы получили очищенную сыворотку с на личием вируснейтрализующих антител в 4,1 раза выше, чем в нативной сыворотке с коэффициентом концентрации на 0,1 белка от 2,6 до 10,6 (в среднем в 3,4 раза). Эта сыворотка в опытах на животных оказалась безвредной и апирогенной. Как указывает С. М. Прегер (1963), оптимальными условиями перевара противоэнцефалитиой сыворотки являются следующие величины: pH 3,25—3,30 — первый час, 4,19—4,21— второй час и 4,3—4,33 — третий час. При этом выход сыворотки по индексу нейтрализации колебался от 21 до 69%, а в среднем составлял 30%. В дальнейшем было показано, что лучший выход очищенной сыворотки получается при использовании гретой сыворотки без применения предварительного осаждения, при этом все варианты очищенной сыворотки имели 2 фракции: гамма-глобулин (от 92,1 до 97,4%) и бета-глобулин (от 2,6 до 4%). В дальнейшем было показано, что сыворотка, изготовленная методом Диаферм-3, не приводит к концентрации вируснейтрализующих антител, хотя содержание антигемагглютининов нарастает до 16 раз и в среднем индекс концентрации составляет 3,7 раза. Комплементсвязывающие антитела разрушаются при пептическом переваре (С. П. Карпов с соавт., 1963; А. И. Иваненко, И. В. Мельникова, 1965).

Сыворотка, очищенная методом Диаферм-3, должна быть стерильной, прозрачной, или незначительно опалеецировать, желтого или бледно-золотистого цвета, безвредна, апирогенна, содержать белка в среднем 14%, но не более 20% и быть специфически активной.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202