|
Схема Ю.В. Федорова
В настоящее время в практике производства сыворотки против клещевого энцефалита используют схему, разработанную Ю. В. Федоровым, 1966. В качестве антигена применяют либо 10%-ную вируссодержащую суспензию мозга белых мышей, либо антиген из вируса, репродуцированного в культуре клеток эмбриона курицы. Иммунизация мозговым антигеном производится подкожно или внутримышечно, культуральный антиген вводится, как указано выше, одновременно внутримышечно и внутривенно. Интервалы между инъекциями составляют в первые 3 цикла 6—7 дней. Последующие циклы иммунизации содержат 2—3-кратное введение антигена в дозе 20—60 мл с интервалами в 4—5 дней. Кровопускания производятся на 7—8-й день после последней инъекции вируса. Интервалы между циклами не превышают 14 дней.
Попытки получить очищенную сыворотку были предприняты в 1941 г., когда Е. Н. Левкович и Н. В. Катан испытали метод диализа и пришли к заключению, что очищенная сыворотка обладает большей специфической активностью, чем нативная. Позже были проведены исследования (О. Г. Анджапаридзе с соавт., (1956) по очистке и концентрации противоэнцефалитной сыворотки методом водного диализа, но авторы пришли к выводу о невозможности получения препарата, однородного по белковому составу. Неудовлетворительные результаты были получены и при очистке и концентрации нативной сыворотки методом ферментативного гидролиза.
Первые успешные исследования в этом направлении предприняты в Томском институте вакцин и сывороток С. М. Прегер и М. А. Автономовой (1956). Применив метод пептического перевара, авторы получили очищенную сыворотку с на личием вируснейтрализующих антител в 4,1 раза выше, чем в нативной сыворотке с коэффициентом концентрации на 0,1 белка от 2,6 до 10,6 (в среднем в 3,4 раза). Эта сыворотка в опытах на животных оказалась безвредной и апирогенной. Как указывает С. М. Прегер (1963), оптимальными условиями перевара противоэнцефалитиой сыворотки являются следующие величины: pH 3,25—3,30 — первый час, 4,19—4,21— второй час и 4,3—4,33 — третий час. При этом выход сыворотки по индексу нейтрализации колебался от 21 до 69%, а в среднем составлял 30%. В дальнейшем было показано, что лучший выход очищенной сыворотки получается при использовании гретой сыворотки без применения предварительного осаждения, при этом все варианты очищенной сыворотки имели 2 фракции: гамма-глобулин (от 92,1 до 97,4%) и бета-глобулин (от 2,6 до 4%). В дальнейшем было показано, что сыворотка, изготовленная методом Диаферм-3, не приводит к концентрации вируснейтрализующих антител, хотя содержание антигемагглютининов нарастает до 16 раз и в среднем индекс концентрации составляет 3,7 раза. Комплементсвязывающие антитела разрушаются при пептическом переваре (С. П. Карпов с соавт., 1963; А. И. Иваненко, И. В. Мельникова, 1965).
Сыворотка, очищенная методом Диаферм-3, должна быть стерильной, прозрачной, или незначительно опалеецировать, желтого или бледно-золотистого цвета, безвредна, апирогенна, содержать белка в среднем 14%, но не более 20% и быть специфически активной. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|