|
Среды выращивания Cl. botulinum
Помимо вышеуказанной мясной среды, использовали для приготовления токсина Cl. botulinum типа Е мясо-пептонный бульон с кусочками мяса или печени, а также мясной бульон — из пептического гидролизата мяса (Е. Д. Кушнир, 1937), питательную среду — из отвара бычьего сердца с1 кусочками рубленого мяса (С. Dolman, D. Kerr, 1947) или из настоя сердца с 1—2% пептона и 0,5% глюкозы (A. Barron, G. Reed, 1954), бульон Хоттингера (К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, 1959).
По материалам Н. Meisel с соавт. (1964), наиболее оптимальной средой для токсинообразования Cl. botulinum типа Е является бульон из мяса и печени, переваренных папаином, на котором получали токсин силой 104 DLm/мл.
Использовались для производства токсина типа Е также казеиновые среды (A. Barron, G. Reed, 1954; Е. Brewnn, 1963 и др.). Однако токсинообразование на них было слабое.
В последние годы были получены ботулинические токсины типа Е на средах, в которых мясной субстрат был частично или полностью вытеснен ферментативными или кислотными переварами казеина и рыбной муки с добавлением в качестве ростовых факторов кукурузного и дрожжевого экстрактов. Так, К. И. Матвеев, Т. И. Булатова (1959), А. А. Воробьев с соавт. (1962) для получения токсина Cl. botulinum типа Е выращивали штамм, на рыбо-казеиновой среде (К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, 1959), на казеиново-грибной (Т. И. Булатова, К. И. Матвеев, И. Н. Виноградова, 1959).
В. И. Чернявский (1970), О. И. Зимина с соавт. (1971) разработали для производства токсина Cl. botulinum типа Е казеиново-альбуминовую среду, состоящую из кислотного гидролизата казеина, панкреатического гидролизата альбумина крови крупного рогатого скота и 3% декстрина. Полученный на этой среде токсин содержал 3—7 тыс. DLM/мл, анатоксин — 3—3,5 ЕС/мл. М. Gordon с соавт. (1957) и М. Fiock с соавт. (1961) предложили для культивирования Cl botulinum типа Е немясную питательную среду, состоящую из 2% пептон-протеазы, 2% дрожжевого экстракта и 1 % глюкозы. Полученные на этой среде токсины содержали 5000 DLM.
При сравнении токсинообразования Cl. botulinum типа Е на различных питательных средах (бульон Мартена, Глузмана и безмясные питательные среды, содержащие кислотный гидролизат китовой муки или ферментативный перевар казеина с кукурузным экстрактом) наилучшее, токсинообразование наблюдалось на бульоне Мартена (Ю. А. Шаронов. Р. А. Афанасьева, 1968). Уменьшение в бульоне Мартена пептона и замена его кислотным или панкреатическим гидролизатом казеина не снижало активности токсина (К. А. Шаронов, Р. А. Афанасьева, Г. С. Атаманова, 1970); G. А. Соловьевой (1973) было проведено сравнительное изучение токсинообразования Cl. botulinum типа Е на различных мясных питательных средах (бульон Мартена, Рамона, Глузмана, Попе). Ей было показано, что наилучшее токсииообразование наблюдается на бульоне Мартена, затем на бульоне Рамона.
Токсин типа Е впервые был получен в 1958 г. (V. Moller, I. Scheild, 1960). И. М. Михайлова (1965), И. М. Михайлова,
В. К. Гольшмид (1966) на печеночном бульоне получали его с активностью 20 тыс. DLM/мл для белых мышей, В. П. Ца- рапкнн (1970) на среде из пептона Мартена, кукурузного экстракта и мальтозы — в 1,5—2 млн. DLM/мл и 3 L+,; Е. В. Перова, Т. И. Булатова, Л. С. Лукина (1970) на не мясной среде получали токсин F в 100000—200000 Dlm/мл для белых мышей. Н. А. Лихварь, И. Н. Виноградова, Е. В. Власова, Л. С. Лукина, Е. В. Перова (1969) использовали с этой целью сухой гидролизат казеина средней степени расщепления и получили токсин 50 000 Dlm/мл. Сравнительное культивирование Cl. botulinum типа F на различных питательных средах: бульоне Мартена, среде из пептона Мартена с кукурузным экстрактом, мальтозой и глюкозой, бульоне Глузмана, печеночном бульоне, среде из гидролизатов китовой муки и казеина выявило наилучшее токсинообразование на среде из пептона Мартена с кукурузным экстрактом и классическом бульоне Мартена (В. П. Царапкин, 1972). 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|