Исследования в области особоопасных инфекций

Схема метода Диаферм-3

Реакторы, кассетные фильтры, сепараторы и другие заменили бачки, стаканчиковые центрифуги, воронки.

При очистке и концентрации антитоксических сывороток методом Диаферм-3 количество антитоксина на 1 г белка повышается в 3,8 раза, титр увеличивается в 6—8 раз при содержании белка до 20% (А. В. Бейлинсон, 1959), выход антитоксина составляет 50% (И. С. Базилевская с соавт., 1955).

Следует отметить, что наибольшие потери антитоксина приходятся на первый час ферментации — 31—47% (И. Л. Теодорович, с соавт., 1956). И. Я. Сильд (1956) наблюдал до 41% потерь. По данным А. В. Бейлинсон с соавт. (1958), на I стадии очистки по противодифтерийной сыворотке отмечается 25% потери антитоксина, по противостолбнячной — 32%, при термоденатурации — 8—14%.

На потери антитоксина оказывают влияние многие факторы, в том числе длительность эксплуатации продуцентов.

Наибольший выход 3. И. Сосина и Л. Н. Изумрудова (1957) наблюдали у лошадей-продуцентов противодифтерийной сыворотки со средней длительностью эксплуатации.

По данным А. В. Бейлинсон с соавт. (1964), потери антитоксина в обрабатываемой противостолбнячной сыворотке от 1-го цикла составляют 67%, после 10-го цикла — 20%. Особенно большие потери в гамма-фракции — до 40%. На это же указывают В. Н. Мирскова с соавт. (1967).

По данным А. И. Михайлова с соавт. (1958), на отдельных этапах очистки и концентрации сывороток по методу Диаферм-3 потери антитоксина колеблются в пределах 10—15%. Общие потери для противостолбнячной и противодифтерийной сывороток составляют в среднем 60% при удалении от 83,7 до 85,6% белка и увеличении нагрузки на 1 г белка от 2,4 до 2,9%.

Схема метода Диаферм-3

I стадия

Сыворотка разводится до 3% белка
Ферментолиз при 23° 1 ч при pH - 3,2; 1 ч при pH - 4,2
Термоденатурация (добавление 14% (NH4)2S04 и прогревание при pH 4,3, 58° 45 мин.)
Фильтрация

II стадия

Осадок отбрасывается Высаливание иммунного глобулина: в фильтрат с pH 7,0—7,1 добавляется до 34%-ной концентрации NH4)2S04
Фильтрация
Фильтрат отбрасывается. Осадок иммунного глобулина прессуется
Диализ иммунного глобулина до 0,2% (NH4)2S04

III стадия
Освобождение антитоксина от балластного белка хлороформом и подкислением НСl.
Сепарирование
Осадок балластного белка и хлороформ отбрасываются.
Стандартизация раствора антитоксина до 0,85% NaCl и pH 6,8—7,0
Стерилизующая фильтрация

Сыворотки, очищенные методом протеолиза, обладают сниженными антигенными, анафилактогенными свойствами (A. Weil, I. Parfentjev, К. Bowman, 1938; С. И. Диденко, Ф. А. Черткова, 1951; Ш. Л. Деречинская, Е. Я. Ермакова, 1948; Н. А. Курочкина, 1952; Ф. А. Черткова, Т. В. Шаповалова, 1952; А. А. Ушакова, 1952; Л. С. Базилевская с соавт., 1955; Г. Г. Зиннаск, А. А. Шарашкина, 1959; А. А. Колчурина, 1959; Г. К. Христова, 1962; Г. П. Петрова, Н. И. Криводубская, 1962), хорошими резорбционными (Л. С. Базилевская с соавт., 1955). Повышается у большинства серий сила авидитета (В. Б. Фрейман, 1958). Однако Ф. А. Черткова с соавт. (1952, 1962) указывают, что аллергенные свойства в таких сыворотках все еще значительны.

По электрофоретической подвижности они сравнительно однородны. Основное количество белков таких сывороток совпадает с гамма-, бета-глобулинами нативных сывороток (G. Amoureux, F. Уеа, 1951; Н. А. Пономарева с соавт., 1956; В.Н. Мирскова с соавт., 1957; А. А. Шарашкина, 1959).

Изучение длительности нахождения их в организме показало, что они уже на 6-й день в значительной степени выводятся (Ф. А. Черткова, И. JI. Плетнева, 1952). Титр антител держится на сравнительно высоком уровне в течение 3 суток (Н. X. Музафарова, Г. Е. Синельников, С. М. Прегер, 1973).

Метод Диаферм-3 ИЭМ АМН СССР получил всеобщее признание, он был также внедрен в сывороточное производство Болгарии и Чехословакии.

На протяжении длительного применения данного метода детально изучили все стадии процесса и выявили, что наряду с достоинствами метод имеет ряд существенных недостатков, одним из которых является возможность возникновения пирогена в связи с проведением процесса в открытых условиях. Применение пирогенных серий сывороток вызывало у привитых тяжелейшие реакции, характерные для бактерийных пирогенов, сопровождающиеся резким повышением температуры, ознобом, цианозом, судорогами, снижением кровяного давления.

В 1956 г., по инициативе ГИСК им. Л. А. Тарасовича, был изучен вопрос о наличии в сыворотках пирогена и введен контроль на выявление его (Ф. А. Черткова, Т. В. Шаповалова, 1962).

Основной причиной возникновения пирогена в сыворотках является обсеменение их микробами на этапах концентрации (Т. В. Шаповалова, 1952; Г. Христова с соавт., 1960 и др.).

Самой продолжительной стадией при очистке и наиболее благоприятной для обсеменения материала микрофлорой и возникновения в сыворотке пирогена является диализ (Л. И. Райхер, 1954; Т. А. Витохина, 1965 и др.).

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202