|
Депротеинизация С-полисахаридного комплекса
С целью депротеинизации С-полисахаридного комплекса применяли различные кислоты, кипячение, спирт (W. Tillet,. Т Frencis, 1930; W. Golb с соавт., 1943; Н. С. Anderson, М. Me Carty, 1951; М. В. Далин, 1963). Б. Н. Грачев (1966) сравнил методы депротеинизации, применив с этой целью 0,5 N раствор соляной кислоты, 1 N раствор трихлоруксусной кислоты, ледяную и 1N раствор уксусной кислоты. Он считает, что лучще всего депротеинизацию вести уксусной кислотой при 4,0 pH среды, после чего доводить pH раствора до 7—7,2. В таком виде С-полисахарид сохранял способность осаждать острофазовый белок в течение 3 месяцев наблюдения.
Для выделения С-реактивного белка С. М. Mac Lead и О. Avery (1941) использовали метод фракционирования сернокислым аммонием. По их данным, С-реактивный белок полностью осаждался из разведенной в 2 раза сыворотки насыщением сернокислого аммония между 50 и 75%. Для его элективного выделения авторы применили С-полисахарид. Полисахаридный метод был использован также Т. Abernethy (1941), М. Me Carty (1947), Н. Wood с соавт. (1954), А. Ямпольским (1959), М. П. Пашининым (1961, 1962), Б. Н. Грачевым (1966) и другими. При осаждении С-реактивного белка М. Me Carty, О. Avery (1946) добавляли С-полисахарида из расчета 0,1—0,2 мгмл конечной его концентрации. По данным Б. Н. Грачева (1966), необходимо для осаждения использовать С-полисахарид в эквивалентном соотношении с C-реактивным белком, для чего в пред-варительном опыте выявлять эти соотношения. G. Zach, К. Zummerman (1959) применили для выделения С-реактивного белка бесполисахаридный метод, заключающийся в его сорбции из крови на сернокислом барии с последующей элюцией цитратом натрия. Б. Н. Грачев с соавт. (1966) использовали и другие методы выделения острофазового белка, как-то: сернокислым аммонием, опиртом на холоду, риванолом. Авторы указывают, что наибольший выход С-реактивного белка был получен бесполисахаридным методом при фракционировании сернокислым аммонием и спиртом, лучшая же очистка антигена достигается при фракционировании жидкости сернокислым аммонием с последующим применением соматического С-полисахарида пневмококков. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|