Исследования в области особоопасных инфекций

Усовершенствование технологии производства очищенного адсорбированного дифтерийного анатоксина. Ю. А. Хавкин

В производстве очищенного дифтерийного анатоксина больше всего применяется метод осаждения анатоксина трихлоруксусной кислотой с последующей адсорбцией на гидроокиси алюминия.

По данным ряда авторов (Н. А. Матвеев, А. Поликар), эта методика технически проста и обеспечивает наиболее высокий выход иммуногенного препарата.

Выход и степень очистки дифтерийного анатоксина при осаждении соляной и трихлоруксусной кислотами

В процессе производства очищенного адсорбированного дифтерийного анатоксина Ташкентским научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток в методику был внесен ряд изменений, которые являются предметом настоящего сообщения.

Технологический процесс получения препарата делится на три основные стадии:

1) очистка и концентрация нативного анатоксина,

2) изготовление геля гидроокиси алюминия и

3) адсорбция: очищенного дифтерийного анатоксина на гидроокиси алюминия.

Очистка дифтерийного анатоксина

Известно, что трихлоруксусная кислота (ТХУК) является одним из наиболее сильных осадителей белков. Механизм ее действия, связан с образованием солеобразных трихлорацетат-производных белка.

Однако взаимодействие аниона ТХУК с белком может произойти лишь в довольно кислой среде, и поэтому первые порции дорогостоящего препарата идут лишь на нейтрализацию оснований бульона. Исходя из этих соображений, мы попытались заменить часть трихлоруксусной кислоты соляной.

Для очистки мы использовали нативные анатоксины, полученные по обычной методике со штаммом Парк-Вильямс 8 на средах Мартена и Попе-Смиса в модификации Вагнер-Сахаровой. Часть опытов и производственных закладок производилась с анатоксином, полученным со штаммом Вайссензее на среде Мартена с добавкой 0,4 % мальтозы (М. С. Сулейманян).

Из табл. 1 видно, что 50% трихлоруксусной кислоты заменилось на соляную без ущерба для выхода и степени очистки препарата. Что касается анатоксина, полученного со штаммом Вайссензее, то обычная методика осаждения недостаточно очищала его, в то время как комбинация осадителей давала препараты, удовлетворявшие требованиям инструкции. Описанный прием сэкономил дорогостоящую трихлоруксусную кислоту и снизил cебестоимость препарата.

По нашим данным, оптимальной кислотностью среды при осаждении дифтерийного анатоксина является pH 3,6—3,7, вместо 3,8—4,0 по инструкции. При более низком pH сепарация протекает легче, что позволяет провести процесс в более короткое время с меньшей денатурацией анатоксина.

После сепарации осадок растворялся в 0,05 М растворе буры и доводился 0,2 М раствором борной кислоты до объему для анатоксинов, полученных со штаммом Парк-Вильямс 8, и до 1/10 - 1/13 объема для анатоксинов, полученных со штаммом Вайссензее. Адсорбция порфирина производилась при помощи контакта со свежеприготовленным активированным углем, добавляемым из расчета 10 г/л, в течение ночи в холодильнике. После этого основная масса угля отбивались на центрифуге 20 мин., при 3000 об/мин. и остатки угля удалялись фильтрованием через фильтрующие пластины. Такая процедура сокращала время освобождения от угля и обеспечивала получение высоко концентрированных препаратов, что играет большую роль в последующей адсорбции.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119