Реакция связывания комплемента при амебиазе
Р. А. Карповская, Д. P. Ахмедова, Л. М. Мевзос, М. И. Пыжова при участии Г. М. Гинзбург (ТашгорСЭС)
Амебная дизентерия встречается не часто при заболеваниях кишечника в Средней Азии. По данным некоторых па разитологов, клиницистов (В. Г. Гнездилов, 1937, М. 3. Лейт май, Л. И. Рогова и К. Д. Буров, 1939, А. А. Аскаров, 1957 и др.), она составляет от 4 до 8% в группе хронических кишечных расстройств. Однако в лечебных учреждениях диагноз этого заболевания ставится исключительно редко. Главной причиной неудовлетворительной диагностики кишечного амебиаза является то, что лабораторные работники недоста точно знакомы, а иногда и вовсе не знакомы с морфологией и биологией всей группы амеб, встречающихся в кишечнике человека.
Еще хуже обстоит дело с диагностикой амебиаза печени который очень часто осложняется абсцессами, требующим хирургического вмешательства и нередко заканчивающими летально. Поэтому разработка иммуннобиологических методов диагностики амебиаза очень актуальна.
Крэг в 1928 г. сообщил, что в сыворотке у больных амебиазом имеются комплементсвязывающие антитела. Однак проверка РСК, проведенная автором у больных амебиазом и здоровых людей, показала недостаточную ее специфичность. После этого значение РСК для диагностики амебиаза исследовалось в различных странах различными авторами. Можно указать на работу Meleney and Trye, 1937; Craig.1937 Magath and Meleney 1940; Bozicevich, Reardon and Jones 1942: Chosh N., N.,Chosh H. and Ray, 1948.
В Советском Союзе РСК была проверена в 1936 г М. 3. Лейтман. В большинстве проведенных исследований отмечалась недостаточная специфичность реакции, особенно при хронических формах кишечного амебиаза, и высказывались пожелания о ее дальнейшей разработке и усовершенствовании. Учитывая все это, мы решили применить РСК для диагностики у больных амебиазом после предварительной проверки ее на экспериментальных животных (табл. 1).
Антигены для РСК были приготовлены из четырёх штаммов дизентерийной амебы. Из них А-2 и Л-21 выделены в различное время от больного амебной дизентерией и абсцессом печени, А-3 — от больной острой амебной дизентерией и 19 — от бессимптомного носителя. Все штаммы культивировались на среде Павловой с пенициллином (1000 ед. в 1 мл) с пересевами три раза в неделю.
В штамме А-3 после 12 последовательных пересевов на среду с пенициллином бактерии погибли, за исключением одного вида из группы b. paracoll; микрофлора штаммов А-2, А-21 и 19 состояла из нескольких видов бактерий.
Основную взвесь амеб для приготовления антигенов мы получали путем отстаивания и промывания культур в больших вогнутых часовых стеклах диаметром 7—8 см. Амебы, взвешенные в жидкости, обычно оседают на дно в течение нескольких минут и довольно плотно прилипают к стеклу. Если после этого быстро перевернуть стекло, то жидкость выливается, а основная масса амеб вместе с зернышками крахмала и частью бактерий остается на стекле в его центральной части. Добавляя к этому осадку свежую порцию физиологического раствора и повторяя процедуру отстаивания 2—3 раза, можно добиться значительного обогащения взвеси амебами и относительной очистки ее от бактерий. Водные антигены готовились путем повторного замораживания и отстаивания основной амебной взвеси в рефрижераторе и консервирования мертиолатом. Для приготовления спиртовых антигенов к основной амебной взвеси добавлялось четырехкратное количество спирта; эта смесь выдерживалась в термостате при температуре 37° в течение двух недель.
Для каждого амебного антигена был приготовлен соответствующий контрольный бактерийный антиген из сопутствующей микрофлоры амебного штамма. Рабочие дозы антигенов были от 0,01 До 0,0025; реакция ставилась в объеме 1,0 мл холодным методом.
Результаты предварительной проверки РСК приготовленными антигенами на сыворотках иммунизированных животных представлены в табл. 1. Восемь кроликов получили трехкратные внутривенные вливания по 1 мл амебного антигена с промежутками в семь дней. Кровь для РСК бралась в сроки от десяти дней до трех месяцев. Всего было поставлено десять реакций от иммунизированных кроликов. В пяти из них отмечалась задержка гемолиза в контроле даже с двойной дозой комплемента. В остальных пяти реакциях, где не было задержки в контроле, результаты были явно положительными.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
|