Изменчивость дизентерийных культур бактерий Флекснера (типа «С») под влиянием экстракта, приготовленного из энтерококка
А. А. Абидов
Природа нетипичных культур интересовала микробиологов на всем протяжении развития микробиологии. Однако вопрос о их происхождении до настоящего времени остается открытым.
Большое количество атипичных штаммов выделяется у дизентерийных больных и реконвалесдентов (по данным Ма- нова и Шейнмана, до 25% случаев). Опытами Д. Г. Кудлай (1952, 1954), К. Д. Бурова (1953), Н. G. Семчевой (1956), Г. Р. Гаджиевой 1956), С. И. Гришина, Е. Ф. Калининой и В. С. Галкиной (1956) и многочисленных других авторов доказана возможность направленной изменчивости бактерий кишечной группы при культивировании одних видов микроорганизмов на продуктах распада других.
Как известно, дизентерийные палочки в просвете толстого кишечника связаны сложными взаимоотношениями с нормальной микрофлорой кишечника, в том числе и с энтерококками.
Руководствуясь основным положением мичуринской биологии о ведущей роли внешней среды в развитии органического мира, об изменении наследственных свойств организмов с изменением обмена веществ, мы дизентерийную культуру Флекснера (типа «с») № 1314 культивировали на экстракте из микробных тел энтерококка. В этом случае единственной формой питания для испытуемой Культуры являлись продукты распада бактерий направляющего вида. До постановки опытов испытуемые культуры десятикратно рассеивались и. изучались по биохимическим и серологическим свойствам (табл. 1). Из табл. 1 видно, что взятые в опыт культуры по биохимическим и серологическим свойствам были типичными.
Экстракты готовились по методу Вейля и Биндера в нашей модификации.
В колбы двухлитровой емкости разливали по 200 мл агара Хоттингера и скашивали. После проверки на стерильность питательную среду засевали смывом 18-часовой агаровой культуры энтерококка и инкубировали в течение 18 часов при температуре 37°С.
Выросшую культуру смывали физиологическим раствором поваренной соли и устанавливали стандарт — от 10 до 12 млрд. микробных тел в 1 мл. К 40 мл микробной суспензии добавляли 10 капель толуола. Для разрушения микробных тел колбы со смесью тщательно взбалтывали в течение четырех часов в шюттель-аппарате.
Последующим центрифугированием (при 3000 оборотах в минуту) осаждали грубые частицы, а жидкость пропускали через асбестовую пластинку фильтра Зейтца, используя для этого аппарат Комовского. Фильтрат и служил направляющим фактором и питательной средой для культивирования дизентерийной палочки Флекснера № 1314.
Последняя выращивалась в экстракте при обильной аэрации в аппарате, сконструированном проф. С. И. Гришиным. Для этого в резервуар установки мы наливали 15—20 мл экстракта, засевали 1 мл 18-часовой бульонной культуры испытуемого исходного штамма и ставили в термостат при температуре 37°С. Чтобы создать наиболее благоприятные условия для развития микроорганизмов установку с экстрактом обильно снабжали воздухом, содержащим до 30% кислорода. Как было установлено С. И. Гришиным (1956), обильное снабжение воздухом, содержащим 30% кислорода, наилучшим образом содействует развитию бактерий.
Ежедневно по 0,1 мл из содержимого установки высевалось на две — три чашки с нейтральным агаром и средой Эндо. Для сохранения условий, которые были в аэрационной установке, чашки с агаром заливали экстрактом направляющей культуры. Экстракт добавляли в таком количестве, чтобы покрыть поверхность застывшего агара (2 мл). После 18-часовой инкубации в термостате с чашек снимали по 50 колоний и производили пробную (на стекле) реакцию агглютинации с сыворотками, которые мы приготовляли как к исходным, так и к направляющим штаммам.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
|