Развитие пирогенных свойств бактериально загрязненных сывороток в зависимости от температурного режима
В настоящее время для очистки и концентрации антитоксических лечебных сывороток применяется метод «Диаферм-III».
Метод «Диаферм-III», как известно, имеет ряд преимуществ по сравнению с другими, ранее применявшимися в производстве методами.
Однако этот метод не лишен некоторых недостатков, так как он не устраняет полностью получение таких сывороток, которые приобретают в процессе производства пирогенные свойства.
С 1954 г. по 1956 г. мы изучали степень бактериального загрязнения и пирогенные свойства сывороток, прошедших очистку и концентрацию методом «Диаферм-III», и отметили что пирогенные свойства сыворотка приобретает при обработке ее только весной или летом.
Мы предположили, что образование пирогенных свойств сывороток при наличии бактериального загрязнения, видимо зависит от температурного режима обработки.
Для выяснения этого мы провели ряд экспериментов, которые позволяли сделать определенные выводы и практические предложения.
В начале мы испытали пирогенные свойства и общее количество микробных тел в сывороточных культурах при различных температурных условиях их культивирования. Для этого мы взяли в опыт несколько видов культур, выделен-ч ных из сыворотки на различных этапах обработки их методом «Диаферм-III»:
1. Flavobacterior dormitator,(выделена из нативной сыворотки).
2. Escherichia alcalescens (выделена из сыворотки после стандартизации).
3. Aerobacter cloacae (выделена из сыворотки после первичной дегазации).
4. Streptococcus faecalis (выделена из сыворотки после двух часов ферментативного переваривания).
5. Bacillus subtilis (выделена после диализа).
6. Bacillus tritus (выделена из сыворотки после первичного осаждения белков сернокислым аммонием).
7. Micrococcus cremori viscosi (выделена из сыворотки после первичной дегазации).
Каждая из вышеперечисленных культур в количестве Е00 млн. микробных тел вносилась в две пробирки (10 мл) с нативной не пирогенной сывороткой. Затем одна пробирка помещалась в термостат при температуре 34°, а другая — на ледник при температуре 8°. После культивирования посевов через трое суток определялись общее количество микробных тел с помощью оптического стандарта и пирогенных свойств — биологической пробой на кроликах (табл. 1).
Контроли пирогенности нативной сыворотки до опыта 0,5°С, после трехдневной экспозиции ее на леднике 0,5°С, после трехдневной экспозиции ее в термостате 0,5° С.
Примечание: пирогенные свойства представлены величиной повышения температуры у кроликов против нормы (в градусах Цельсия).
Из табл. 1 видно, что все семь культур, находившиеся при температуре 34°С, размножились до 500 млн. микроорганизмов стандарта и проявили пирогенную реакцию на кроликах выразившуюся повышением температуры от 0,7 до 2°С.
Одноименные сывороточные культуры, находившиеся при температуре 8°С, видимого роста микробных тел не дали и пирогенной реакции не проявили.
Этот опыт показал, что высокая температура (34°С) является более благоприятным фактором как для размножения микроорганизмов, так и для образования пирогенных веществ.
Более низкая температура (8°С), наоборот, является неблагоприятным фактором как для размножения микробов, так и для проявления пирогенных свойств субстрата, в котором они находятся. Теперь понятно, почему пирогенные свойства сывороток, обработанные методом «Диаферм-III», проявляются, как правило, весной и летом, и отсутствуют зимой.
Кроме того, проведенный опыт опять подтвердил:
1. Прямую зависимость пирогенных свойств сывороток от бактериального загрязнения, причем в таких условиях, когда отсутствовало ферментативное расщепление белковой молекулы.
2. Зависимость пирогенных свойств бактериально загрязненных сывороток от количества микробных тел.
Так как мы обнаружили, что пирогенные свойства зависят от степени бактериального обсеменения, то мы решили выяснить, возрастают ли пирогенные свойства по мере дальнейшего размножения микроорганизмов.
Для этого посевы культур оставили в сыворотке (при соблюдении прежних условий) на один месяц и через каждые семь дней проверяли их пирогенные свойства и общее количество микробных тел.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
|