Исследования в области особоопасных инфекций

Агглютинирование антисыворотками направляющей культуры и исходного штамма

Для дальнейшего изучения отбирали колонии, которые агглютинировались антисыворотками направляющей культуры или не агглютинировались антисывороткой исходного штамма.

Для наследственного закрепления вновь приобретенных свойств в сторону направляющего фактора выделенные из аэрационной установки серологически измененные варианты (первичный отбор реакцией агглютинации на стекле) пересевались в пробирки со свежим направляющим экстрактом. После суточной инкубации в термостате при температуре 37°С и шести дней хранения при комнатной температуре из этих пробирок делались отсевы в другую пробирку со свежим экстрактом и на чашку Петри со средой Эндо.

На следующий день со среды Эндо отбиралось пять колоний, которые отсевались на агар и изучались по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам. Если вариант после первого пассажа сохранял свойства, констатированные у него при первичном отборе, через неделю такой же высев и изучение проводились из второй пробирки. Если варианты вновь изменяли свои свойства в сторону направляющей культуры, то культура варианта пересевалась на свежий экстракт.

Такие пассажи мы прекращали тогда, когда убеждались, что глубоких изменений в дальнейшем не наступает, а приобретенные свойства стойко закреплены. При постановке опытов две первые херии исследования не привели к ожидаемым результатам. Вначале при высеве на среду Эндо и на чашках с агаром Хоттингера отмечался рост мелких бесцветных колоний, типичных для дизентерийных бактерий, дававших положительную реакцию агглютинации на стекле только с антисыворотками к исходной культуре. В последующем количество таких колоний уменьшалось, и в конце второй недели при высеве уже до 1 мл из содержимого аэрационной установки роста вообще не было.

Считая, что причиной отрицательного результата явилось малое количество питательных веществ бактериального белка в экстракте № 1483, мы решили поставить третью серию этого опыта, в которой ежедневно после высева добавлялась свежая порция экстракта и подвергалось агглютинации на стекле по 100 колоний, В этой серии опыта на 27 день были выделены два варианта, которые агглютинировались антисывороткой направляющего штамма № 1483 энтерококка в разведении 1 : 10 при титре 1 : 3200, но оба варианта продолжали агглютинироваться сывороткой, приготовленной к исходному штамму дизентерийнойпалочки. Варианты были отсеяны на свежий экстракт № 1483 и обозначены 1314-э-1 и 1314-э-2. По морфологическим свойствам оба варианта представляли собой грамотрицательные полиморфные палочки. По биохимическим свойствам они были сходны с исходной культурой № 1314 (табл. 1). При постановка развернутой реакции агглютинации вариант 1314-э-1 агглютинировался сывороткой к исходной культуре в разведении 1 : 12800; вариант 1314-э-2 в разведении 1 : 3200 (титр 1 : 25600). Антисыворотка к направляющей культуре давала положительную реакцию агглютинации по-прежнему в разведении 1 : 10 (титр 1 : 3200) по истечении недели исследования (после первого пассажа); биохимические свойства вариантов не изменились, но агглютинация сывороткой к исходной культуре понизилась у 1314-э-1 до 1 : 1600, у 1314-э-2 до 1 : 400. Агглютинация сывороткой к направляющему штамму осталась прежней.

После второго пассажа вариант: 1314-э-2 потерял свойство агглютинироваться сывороткой к исходной культуре, у варианта 1314-э-1 она понизилась до 1 :200.

После третьего пассажа оба варианта биохимически вели себя подобно исходной культуре, но, не агглютинировались сыворотками ни исходной, ни направляющих культур. Эти свойства у обоих вариантов не изменились и по настоящее время (1 г. 2 мес.).

Одновременно с основными ставились и контрольные опыты. Для этого подопытный штамм дизентерийной палочки Флекснера № 1314 выращивался в стерильном физиологическом растворе поваренной соли с толуолом в тех же условиях, как и опытные. При этом в первичных высевах отмечался хороший рост типичных неизмененных бактерий, но в последующем он становился более и более скудным и к концу второй недели уже не отмечался, т. е. наступила естественная гибель бактерий. При систематических проверочных высевах изменений не наблюдалось.

Вывод

Культивирование дизентерийных палочек Флекснера (типа «с») № 1314 на экстракте, приготовленном из энтерококка, приводит к выделению неагглютииирующихся вариантов возбудителей дизентерии.

Литература

Буров К. Д. Изменчивость серологических типов дизентерийных бактерий Флекснера под влиянием некоторых факторов. Канд. дис., Ташкент, 1953.

Гришин С. И, Калинина Е. Ф., Галкина В. С. Доказательство методом меченных атомов (Р 32) ассимиляции одним видом бактерий продуктов, распада другого вида. Вопросы краевой патологии, вып. 8, изд. АН УзССР, Ташкент, 1956.

Гаджиева Г. Р. Изменчивость кишечной палочки при культивировании на убитых нагреванием бактериях дизентерии Флекснера.

Изменчивость микроорганизмов. Медгиз, М., 1956.

Д. Г. Направленная изменчивость бактерий кишечной группы. Док. дис., М., 1952.

Д. Г. Изменчивость микроорганизмов кишечной группы, Медгиз, 1954.

Н. С. Направленное изменение свойств кишечной палочки при выращив1ании на тифозных и дизентерийных бактериях в условиях аэрации. Изменчивость микроорганизмов, сообщение II, Медгиз, М., 1956.

Н. С. Направленное изменение свойств тифозных, паратифозных и дизентерийных бактерий при выращивании на кишечной палочке в условиях аэрации. Изменчивость микроорганизмов, сообщение III, Медгиз, М., 1956.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119