Исследования в области особоопасных инфекций

Закрытый способ изготовления казеиново-угольного агара. В. Б. Алферова, А. Д. Мокеева, О. Е. Самойлова

Приготовление казеиново-угольного агара для выращивания коклюшных бактерий по существующей инструкции довольно сложно, трудоемко, агар варится в больших сосудах (кастрюлях), которые нужно переносить в автоклав и вынимать из автоклава. Разливается агар из кастрюль в матрацные колбы мерной кружкой. После стерилизации матрацные колбы должны выдерживаться четверо суток на контроле (двое суток в термостате и двое — при комнатной температуре) для выявления возможного и довольно частого прорастания агара посторонней микрофлорой. По-видимому, при открытой варке агара и открытом розливе его кружкой последующая щадящая стерилизация (110°—30 минут) не обеспечивает стерильности агара.

Схема оборудования реактора для варки казеиновоо-угольного агара. Условные обозначения: а — якорная мешалка; б — фильтр для розлиза; в - ватный фильтр для воздуха; г — термометр; д — сифон для подачи воздуха; е — сифон для розлива.

Для обеспечения стерильности казеиново-угольного агара в вакцинном отделе Ташкентского института вакцин и сывороток совместно с отделом питательных сред был разработан закрытый способ варки и розлива казеиново-угольного агара. Приготовление агара производится в реакторе из нержавеющей стали емкостью в 150 л. Реактор имеет рубашку, якорную мешалку, делаюшую 30 оборотов в минуту, длинную сифонную трубку, доходящую до дна реактора. В крьшкё реактора имеется штуцер для подачи воздуха, гильза для термометра и завинчивающийся люк. Штуцер и длинный сифон снабжены вентилями (рис. 1).

Перед варкой реактор стерилизуется дистиллированной водой при 120° в течение 30 минут. Затем через длинный сифон вода удаляется из реактора и в него через люк загружаются ингредиенты, среды в определенной последовательности. Перед варкой казеиновый кислотный гидролизат освобождается от балластных белков путем подщелачивания его 20 %; NaOH до рН=7,0. При этом выпадает осадок, который отфильтровывается через фильтровальное полотно внутри марлевым мешочком, через который фильтруют агар. Это особенно важно, так как не отфильтрованный осадок адсорбируется в дальнейшем углем и последний неравномерно распределяется по всей толще среды и осаждается хлопьями на дно реактора.

Отфильтрованный казеиновый гидролизат в количестве, рассчитанном по аминному азоту для приготовления нужного объема среды, вливается в реактор через люк, затем добавляется дистиллированная вода и вновь устанавливается pH 7,0, после чего добавляются соли, растворенный крахмал, цистин и предварительно профильтрованный через стерилизующие пластинки дрожжевой аутолизат, устанавливается pH=6,9—7,0 и добавляется агар. Затем люк завинчивается, включается мешалка и в рубашку пускают пар. Температуру доводят до 100° и варят среду 10 минут при перемешивании мешалкой. Следует учесть, что быстрого перемешивания допускать не следует, так как агар вспенивается. Через 10 минут варки пар спускают через штуцер, люк открывают, определяют рН среды, доводят до 7,3 и вливают стерильную 30% суспензию угля, фильтруя через стерильный марлевый мешочек. Люк закрывают, на длинный сифон под факелом надевают стерильную резиновую трубку, заканчивающуюся металлическим наконечником с колпачком. На пути резиновой трубки вставлен фильтр для фильтрования агара. Фильтр — это металлический цилиндр с находящимся внутри марлевым мешочком, через который фильтруют агар.

На короткий штуцер надевается стерильная резиновая трубка с ватным металлическим фильтром, через который в реактор из компрессора нагнетается воздух и выдавливает агар из длинного сифона в матрацные колбы. Розлив агара производится так: под пламенем горелки наконечник под колпачком вводится в стерильную матрацную колбу, которая также открывается под пламенем и поступление агара регулируется зажимом, пережимающим резиновую трубку, затем агар разливается в колбы (матрацные колбы, закрытые ватно-марлевыми пробками, которые предварительно стерилизуются при 127° — 3 часа). После розлива колбы с агаром, также над пламенем, закрываются пробками и стерилизуются в автоклаве при 110°—30 минут, после чего агар скашивается горизонтально.

Весь розлив агара ведется при медленном перемешивании агара мешалкой (30—40 оборотов в минуту). Более быстрое перемешивание вызывает пенообразование и неравномерное распределение угля в агаре.

Закрытый способ варки и розлива казеиново-угольного агара полностью обеспечивает стерильность его при той же щадящей стерилизации (110° — 30 минут), исключает необходимость четырехдневного контроля его, резко сокращает производственный процесс и количество занятых людей при приготовлении агара.

Весь процесс варки, стерилизации и скашивания агара занимает не более 6 часов.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119