Исследования в области особоопасных инфекций

Режим стерилизации жидкой питательной среды в глубинном производстве кишечных вакцин

В настоящее время при изготовлении кишечных вакцин бактерии выращиваются глубинным способом. Выращивание обычно ведется в реакторах-котлах большого объема, куда помещается и жидкая питательная среда в количестве от 150 литров до 500 и более. Большой объем питательной среды усложняет ее стерилизацию. Поэтому необходимо найти такой способ, при котором можно простерилизовать среду и в то же время сохранить ее питательные качества, необходимые для размножения бактерий.

В своих исследованиях мы применили два вида стерилизации больших объемов питательной среды: горячую стерилизацию паром и холодную стерилизацию фильтрованием через стерилизующие пластинки фильтра Сальникова.

Горячая стерилизация производилась пропусканием пара в рубашку герметически закрытого котла с питательной средой, чем достигалась определенная температура среды.

Изучался следующий режим горячей стерилизации: при 120° — 15 мин., при 115°— 30 мин., при 110° — 30 мин., при 105° — 60 мин., при 100 — 60 мин. Продолжительность всей стерилизации, начиная от температуры в 100° до конца процесса, обычно составляла 1,5—2 часа, включая время стерилизации при намеченной температуре.

Опыты проводились в производственных условиях в двух равноценных реакторах емкостью по 250 литров. Испытывались объемы сред от 150 До 200 л и выращивались только бактерии Флекснера. Применялись следующие питательные среды: бульон из Казеинового гидролизата, бульон из смеси казеинового гидролизата и 40% дрожжевого аутолизата.

Казеиновый бульон готовился так: казеиновый гидролизат триптического переваривания, предварительно простерилизованный впрок при 0,5 атм. 20 минут, фильтровался через вату и разводился водопроводной водой из расчета содержания в готовом бульоне 250 мг/% аминного азота. К нему добавлялся хлористый натрий в количестве 0,5% до рН=7,6—7,8. Затем в пароварочном котле этот бульон варился при температуре 98-100° и горячий фильтровался через фильтровальное полотно. После фильтрования бульон заливался в реактор и стерилизовался при заданной в опыте температуре.

Бульон из смеси казеинового бульона и дрожжевого аутолизата готовился из обычного казеинового пептона, к которому добавлялся аутолизат в количестве 40%. Дрожжевой аутолизат приготовлялся следующим образом: пивные дрожжи наливались в бутыли и ставились на 48 часов в водяную баню при 50° для аутолиза дрожжевых клеток. Верхний слой аутолизата декантировался от дрожжевых клеток и стерилизовался впрок при 0,5 атм, 20 мин. Этот дрожжевой лизат добавлялся к казеиновому бульону из расчета содержания в нем 250 мг/% аминного азота. Затем бульон варился в пароварочном котле, фильтровался, переливался в реактор и стерилизовался при намеченной в опытах температуре. По окончании стерилизации производился так называемый «монтаж» котла при температуре в 100° С.

«Монтаж» котла имеет большое значение для обеспечения стерильности питательной среды. Он заключается в подсоединении к котлу шлангов для подачи и удаления воздуха и опускании в широкий люк котла сифонов, укрепленных на пластине из нержавеющей стали. Через эти сифоны производится в дальнейшем засев посевного материала в котел, добавление глюкозы и выемка проб в процессе выращивания. Вставлять пластину с сифонами необходимо при температуре не ниже 100° С, иначе в котел может засосаться наружный воздух, который нарушит стерильность питательной среды.

Для сохранения стерильности питательной среды полностью обеспечивалась стерильность воздуха, подаваемого в реактор при выращивании. Воздух подавался воздушным компрессором сначала в специальный ватно-угольный воздушный фильтр, который стерилизовался паром, подававшимся в его рубашку. Из воздушного фильтра по шлангу воздух проходил в реактор, причем по ходу шланга вставлялся ватный фильтр (полый цилиндр из нержавеющей стали, заполненный ватой и простерилизованный в автоклаве).

Проделанная работа показала, что все применявшиеся варианты режима горячей стерилизации полностью обеспечивают стерильность среды. Режим стерилизации не изменял содержания аминного азота в питательной среде и не отражался на конечном урожае выращиваемых бактерий.

Густота выращенной микробной взвеси при различном режиме стерилизации равнялась 21—31 млрд, микробных тел в 1 мл. Однако наиболее густая микробная взвесь получалась при стерилизации среды в течение 30 минут при 115°, при этом густота микробной взвеси в среднем была равна 31 млрд. в 1 мл, а в смеси казеинового бульона с дрожжевым аутолизатом — 27,5 млрд. При других режимах стерилизации густота микробной взвеси составляла от 24 до 26 млрд в 1 мл при выращивании в казеиновом бульоне и от 19 до 23 млрд. в 1 мл при выращивании в смеси казеинового бульона с дрожжевым лизатом. С чистым дрожжевым аутолизатом опыты проводились только при двух вариантах режима стерилизации при 105° С — 60 мин. и при 100°С - 60 мин. В данном случае густота выращенной микробной взвеси была от 19 до 29 млрд. в 1 мл.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119