Исследования в области особоопасных инфекций

Горячая и холодная стерилизация

Предполагая, что горячая стерилизация разрушает в питательной среде «ростовые» вещества и витамины, мы применили «холодную» стерилизацию. При холодной стерилизации бульон фильтровался через стерилизующие пластинки фильтра Сальникова непосредственно в реактор, предварительно простерилизованный. Объем среды в реакторе после фильтрования был равен 50—100 литрам. Выращивать бактерии Флекснера на фильтрованном дрожжевом бульоне было нельзя, так как через 2—4 часа после засева посевного материала наблюдалось помутнение среды, в мазках обнаруживалась специфическая микрофлора, густота микробной взвеси достигала 2—4 млрд. микробных тел в 1 мл, но к 6 часам выращивания специфическая микрофлора исчезала и в мазках обнаруживались комочки бесформенного детрита.

На фильтрованном казеиновом бульоне иногда наблюдалось такое же явление, но в единичны опытах удавалось получать урожай бактерий густотой в 40 млрд микробных тел в 1 мл.

Выяснилось, что прекращение размножения бактерий в профильтрованной через стерилизующие пластинки питательной среде связано с наличием литического агента, появляющегося через 4—6 часов после засева посевного материала в реактор.

Изучение свойств литического агента показало следующее: он обнаруживает свое, действие только спустя определенное время после засева бактерий Флекснера в питательную среду. Литический агент обладает, специфичностью, что показывают следующие опыты.

1) во флаконы со 100 мл бульона засевалось 5 мл суточной бульонной культуры бактерий Флекснера, Шига и Крузе-Зонне. Затем добавлялось по 5 мл лизированной микробной взвеси бактерий Флекснера из реактора. Через сутки оказалось, что во флаконах с культурами Флекснера и Шига бульон был прозрачным, а во флаконе с культурой Крузе-Зонне — мутным;

2) на чашки со свежезасеянной шпаделем культурой Флекснера, Шига и Крузе-Зонне наносилось по одной капле лизированной микробной взвеси из реактора. Через сутки на чашках с бактериями Флекснера и Шига в месте нанесения капли обнаруживались стерильные пятна, а по всей чашке с бактериями Крузе-Зонне появлялся специфический рост;

3) лизированная микробная взвесь из реактора профильтровывалась через фильтр Зейтца, а затем оттитровывалась по Аппельману с культурами Флекснера, Шига и Крузе-Зонне. Культуры Флекснера и Шига лизировались в разведении 10 -7 а Крузе-Зонне совершенно не лизировались.

Литический агент оказался термоустойчивым и выдерживал прогревание при 70—75° в течение 30 мин. и содержание его в термостате при 37° в течение года не лишало литических свойств, а кипячение в течение 2 мин. уничтожало его литическую способность.

Тотчас же после фильтрования бульона он в нем не обнаруживался и требовалось добавление бактерий и некоторого времени контакта, чтобы можно было выявить наличие литического агента. Это свидетельствует о том, что он накапливается в питательной среде, по-видимому, за счет размножения.

Итак, надо полагать, что по свойствам литический агент, появляющийся в профильтрованном через стерилизующие пластинки бульоне, является бактериофагом и заносится в среду при фильтровании бульона, а добавление бактерий создает условия для его накопления.

Выводы.

1. Стерилизация больших объемов питательной среды для глубинного выращивания бактерий Флекснера полностью обеспечивает их стерильность при следующем режиме: при температуре в 120° в течении 15 мин.; 110° - 30 мин.; при 105° — 60 мин. и при 100° — 60 мин.

2. Все испытанные варианты горячей стерилизации сохраняли в почти одинаковой степени питательные свойства среды, но наилучший урожай бактерий получался при стерилизации среды в течение 30 мин. при 115°

3. «Холодная» стерилизация путем фильтрования питательной среды через пластинки фильтра Сальникова обеспечивала стерильность среды в объёме 50—100 литров.

4. «Холодная» стерилизаций сохраняла питательные свойства среды и «урожай» выращиваемых на ней бактерий был вполне удовлетворительным (40 млрд. в 1 мл).

5. «Холодную» стерилизацию нельзя рекомендовать для производственных целей, так как в большинстве случаев при ней появляется литический агент, который полностью лизирует выросшие бактерии.

6. Литический агент специфичен, термоустойчив, появляется только после размножения бактерий и поэтому является, очевидно, бактериофагом.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119