Тест проверки степени бактериального обсеменения сыворотки
Тестом проверки степени бактериального обсеменения сыворотки до сентября месяца 1954 г. был метод подсчета колоний на чашках Петри с нейтральным агаром. С октября 954 г. степень бактериального загрязнения сыворотки определялась методом последовательного разведения (рекомендовано Государственным контрольным институтом вакцин и сывороток).
Тестом проверки пирогенных свойств являлось внутривенное введение испытуемых проб кроликам в количестве
2 мл (до сентября 1954 г.) к 0,1 мл (с октября 1954 г.), рекомендованным также ГКИВС.
Степень бактериального загрязнения и пирогенные свойства мы обследовали 23 серии противодифтерийных сывороток, прошедших очистку и концентрацию методом «Диаферм-III» с марта 1954 г. по сентябрь 1957 г. Каждая из 23 серий обследовалась по этим показателям на шести различных этапах производственного процесса в нативном виде (до начала обработки), после первичной дегазации, после двух часов ферментативного переваривания, после первичного осаждения белков сернокислым аммонием, после стандартизации и в готовом виде после стерилизующей фильтрации.
На основании проведенной работы мы констатировали следующее. Нативная сыворотка во всех 23 пробах оказалась стерильной и не пирогенной. Сыворотка после первичной дегазации характеризовалась бактериальным загрязнением от 10 до 6250 микробных тел в 1 мл. Показатели пирогенности сыворотки после дегазации были такими же, как и нативной сыворотки.
Дистиллированная вода в наших опытах иногда оказывалась значительно загрязненной, особенно при обработке первых партий сыворотки. Количество микробных тел в ней достигало 6560 в 1 мл. Убедившись в возможности такого бактериального загрязнения сыворотки дистиллированной водой, мы путем замены шлангов и обработкой их 5% раствором карболовой кислоты, пропаривания мерников и другими мероприятиями добились снижения количества микробных тел до 20—50 в 1 мл, а иногда и полного отсутствия в ней роста.
После, двух часов ферментативного переваривания сыворотки мы зарегистрировали до 1250 микробных тел в 1 мл. Пирогенную реакцию обнаружили две пробы при пользовании тестом в 2 мл сыворотки на 1 кг веса кролика.
После первичного осаждения белков сернокислым аммонием количество микробных тел в 1 мл сыворотки резко возрастало, иногда достигая 40 000. Такое резкое увеличение микробного загрязнения на этом этапе можно связать с тем, что сыворотка после осаждении фильтровалась в общем помещении и в нее из воздуха попадало большое количество микроорганизмов. После выведения этого процесса в специальные боксы бактериальное обсеменение сывопотки на этом этапе резко снизилось (до 1250 микробных тел). Пирогенные свойства сыворотки на этом этапе не проверялись, так как большое содержание в ней сернокислого аммония вызывало гибель кроликов.
После диализа зарегистрировали самую высокую степень бактериального загрязнения. Количество микробных тел в 1 мл достигает в отдельных случаях 7 300 000. Такое резкое увеличение количества микробных тел на этом этапе объясняется тем, что из сыворотки, заключенной в целофановые мешочки, могут диффундировать вместе с сернокислым аммонием и продукты жизнедеятельности микроорганизмов, обусловливая тем самым некоторое обновление питательной среды и создавая условия для большего микробного размножения.
Пирогенные свойства сыворотки после диализа выразились также максимальными температурными показателями: температурный прирост у кроликов достигает в отдельных случаях 3,6°С. Пирогенными на этом этапе оказались все сыворотки, испытанные тестом в 2 мл и одна сыворотка, испытанная тестом в 0,1 мл на 1 кг веса кролика.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
|