Исследования в области особоопасных инфекций

Препаративный электрофорез нормальной и противоядной сывороток

Из табл. 3 видно, что наибольшее количество γ1 (T) + γ2 глобулинов приходится на сыворотки с наименьшим содержанием общего белка. Интересно, xто и гамма-глобулин, выделенный препаративным электрофорезом, оказался наиболее активным в этих же сыворотках.

Количество альбумина во всех иммунных сыворотках резко уменьшено.

Сравнительное содержание гамма-глобулинов в нормальной и противоядной сыворотках (в %)

Полученные данные говорят за преимущественную связь противоядной активности сыворотки с γ -глобулином (γ1 + γ2)

Чтобы подтвердить это, мы определяли у яда гюрзы активность белковых фракций сыворотки, выделенных методом препаративного электрофореза и солевого фракционирования.

Для препаративного электрофореза применяются самые разнообразные наполнители (крахмал, желатин, агар-агар, кварцевый песок, бумажное тесто). Мы воспользовались в своей работе модификацией, предложенной Ю. А. Хавкиным. По этому методу к исследуемому образцу сыворотки добавляется 1/10 часть 0,5 м раствора боратного буфера с рН=8,6. Сыворотка, разбавленная буфером, вносится при помощи шприца в толщу асбоцеллюлозной пластины (фильтрующие 30 см пластины Ленинградского завода) размером 6X30 см в виде узкой полосы ближе к одному концу. Электрофорез проводится в боратном буфере с рН=8,6 и М=0,05. На один сантиметр ширины полоски наносится 0,6—0,7 мл разведенной сыворотки. Напряжение на электродах равнялось 60—80 v при силе тока 15—18 мА. По окончании электрофореза, обычно через 24 часа, с обеих сторон пластины снимаются отпечатки на фильтровальную бумагу с последующей окраской ее бромфеноловым синим. При удовлетворительном разделении пластинки разрезаются по границам фракций и из вырезанных участков выжимается необходимая фракция. Далее каждая из полученных фракций подвергалась электрофоретическому исследованию для выяснения ее чистоты. Электрофорез проводился после предварительного концентрирования фракций над фосфорным ангидридом.

Связь противоядной активности с белковыми фракциями сыворотки

Для титрования каждой фракции разделению подвергались 30—35 мл исследуемой сыворотки. В каждой полученной фракции определялся белок азотометрически с тем, чтобы вводить известное количество белка при титровании. Таким путем удалось установить полное отсутствие противоядной активности в альбуминовой фракции и связь активности с глобулинами. Распределение противоядной активности по глобулиновым фракциям приведено в табл. 4.

Из табл. 4 видно, что наибольшей активностью обладает гамма-глобулин, хотя в некоторых сыворотках активность его близка активности бета-глобулина. Наименьшей активностью обладает альфа-глобулин.

В асбоцеллюлозных пластинах не удалось разделить гамма-глобулин на две части (γ1 и γ2) поэтому мы попытались определить активность промежуточных фракций. Для этого выделялся белок из участков пластины между гамма- и бета-глобулинами и бета- и альфа-глобулинами. Оказалось, что активность этих белков близка активности соседних фракций (табл. 5).

Фракции, полученные солевым фракционированием по методике Кона, также исследовались. Из сыворотки было получено шесть фракций, которые после диализа подверглись титрованию на активность. Шестая фракция была разделена на две части сульфатом аммония (табл. 6).

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109   110   111   112   113   114   115   116   117   118   119