Исследования в области особоопасных инфекций

Методы введения антигена для получения противогриппозной сыворотки

Для получения сыворотки с достаточно высоким титром антител рекомендуется вводить антиген внутривенно (Ю. К. Петров, 1958; 3. Г. Пейсель, С. И. Овсянкин, 1960: И. Е. Алатырцева с соавт., 1965; Н. Н. Орлова с соавт., 1965). 3. Г. Пейсель, (1959; 1960), проводя сравнительное изучение эффективности способов введения антигена, пришел к выводу, что внутривенно-капельный метод инъекции отличается от внутривенно-струйного тем, что обеспечивает почти полное отсутствие реакций с картиной анафилактических шоковых явлений, уменьшает расход антигена и в 1,5—2 раза усиливает выработку антител по сравнению с подкожным методом иммунизации. Имеются указания и о перспективности использования подкожного метода введения антигена (С. Л. Хайт, А. С. Виноградова, 1944; Ю. К. Петров, 1959; 1960).

Н. Н. Орлова, А. В. Бейлкнсон (1958) рекомендуют иммунизировать животных комбинированным методом, путем одновременного введения антигена подкожно, внутримышечно и внутрикожно. Указанный спрсоб обеспечивает возможность быстрого получения противогриппозной сыворотки и в достаточно высоком титре.

Чаще всего применяют введение возрастающих доз антигена с интервалами в 4—5 дней (С. Л. Хайт, А. С. Виноградова, 1944; Ю. К. Петров, 1959; 3. Г. Пейсель, С. И. Овсянкин 1960), реже с промежутками в 6—7 дней (М. Г. Гайдамака с соавт., 1960). Вместе с тем есть указания (Л. И. Калинина, 1957), что увеличение интервалов между инъекциями до 16—38 дней сопровождается более интенсивным нарастанием антител.

Кровопускания осуществляются обычно на 7—8-й день после последней инъекции антигена (Ю. К. Петров, 1959; И. Е. Алатырцева с соавт., 1965). Значительно способствует повышению иммунологической реактивности продуцентов предварительное грундирование вирусом гриппа. По данным Ю. К. Петрова (1968), около 80% грундированных лошадей через 35—40 дней с момента начала гипериммунизации дали сыворотку с титром антител в РТГА от 1:400 до 1:2560.

Противогриппозная сыворотка в производственных условиях готовится по регламенту, разработанному сотрудниками Ленинградского НИИВС и отдела вирусологии институт Экспериментальной медицины АМН СССР. С этой цель лошадей иммунизируют антигеном, содержащим штаммы в руса типа Аг и В, внутривенно-капельным методом. Антиге вводится возрастающими дозами с интервалом в 2—4 дш Первые инъекции осуществляются нативной аллантоисно жидкостью или диализованным вирусом с последующи переходом на концентрированный антиген. Титр антител дол жен быть к вирусу А2 не ниже 1:400, а к В — 1:800.

Предпринимаются попытки, направленные на получени специфического лечебного препарата из сыворотки молок; л актирующих коров (Т. И. Крюченкова с соавт., 1966 В. М. Петришва, 1968) с целью замены белка сыворотки лошади. Коровам через сосковый канал молочной железь вводится свежеприготовленная вируссодержащая аллантоис ная жидкость с инфекционным титром 6,0—7,0 log. Така иммунизация позволяет повысить содержание антител в лакт сыворотке до уровня 1:100 — 1:200.

Хороший эффект наблюдается при использовании комбинации применения антигена внутривенно, подкожно и в сосок молочной железы. Первые опыты по получению очищенной и концентрированной противогриппозной сыворотки были предприняты P. Laidlaw с соавт. (1935), которым при помощи высаливание белков сернокислым натрием удалось сконцентрировать иммунные белки в 8—12 раз. Впоследствии Hare (1939), используя методы высаливания сернокислым аммонием и сернокислым натрием, а также спиртовый, изготовил концентрированную сыворотку. А. В. Бейлинсон с соавт. (1960) провела очистку и концентрацию поливалентной противогриппозной сыворотки методом фракционного высаливания и показали, что антитела представляют глобулин, выпадающий в осадок при концентрации сернокислого аммония в сыворотке 34—38%. Насыщение сернокислым аммонием до концентрации 30% позволяет получать гомогенный гамма-глобулин, не содержащий антител. Добавление от 30 до 38% сернокислого аммония приводит к концентрации сыворотки в 4 раза, а выход антител доходит до 80% (Г. X. Шайхет, 1955; Г. X. Шайхет с соавт., 1959).

Интересные наблюдения опубликовали Ю. К. Петров и А. А. Шарашкина (1960). Проводя сравнительные опыты по получению очищенной сыворотки методами водного диализа, электродиализа и Диаферм-3 (табл. 15), авторы приходят к выводу, что лучшим методом получения препарата является высаливание всех глобулинов сернокислым аммонием с последующим разделением их на эвглобулины водным диализом. Метод ферментативного гидролиза оказался непригодным.

С успехом применяется для очистки противогриппозной сыворотки метод осаждения спиртом на холод (Н. А. Пономарева с соавт., 1956; М. Г. Гайдамака с соавт., 1958).

В настоящее время противогриппозная сыворотка выпускается как в нативном виде, так и очищенной от балластных белков методом осаждения спиртом на холоду. В реакции биологической нейтрализации на куриных эмбрионах сыворотка в разведении 1:150 должна нейтрализовать не менее 100 000 ИД50 вируса гриппа типа Аг и не менее 10 000 ИД50 вируса гриппа типа В, а в РТГА не ниже 1:800 штамм вируса типа В и 1:400 типа А2. Сыворотку лиофилизируют и выпускают в смеси с сульфаниламидами.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202