|
Методы введения антигена для получения противогриппозной сыворотки
Для получения сыворотки с достаточно высоким титром антител рекомендуется вводить антиген внутривенно (Ю. К. Петров, 1958; 3. Г. Пейсель, С. И. Овсянкин, 1960: И. Е. Алатырцева с соавт., 1965; Н. Н. Орлова с соавт., 1965). 3. Г. Пейсель, (1959; 1960), проводя сравнительное изучение эффективности способов введения антигена, пришел к выводу, что внутривенно-капельный метод инъекции отличается от внутривенно-струйного тем, что обеспечивает почти полное отсутствие реакций с картиной анафилактических шоковых явлений, уменьшает расход антигена и в 1,5—2 раза усиливает выработку антител по сравнению с подкожным методом иммунизации. Имеются указания и о перспективности использования подкожного метода введения антигена (С. Л. Хайт, А. С. Виноградова, 1944; Ю. К. Петров, 1959; 1960).
Н. Н. Орлова, А. В. Бейлкнсон (1958) рекомендуют иммунизировать животных комбинированным методом, путем одновременного введения антигена подкожно, внутримышечно и внутрикожно. Указанный спрсоб обеспечивает возможность быстрого получения противогриппозной сыворотки и в достаточно высоком титре.
Чаще всего применяют введение возрастающих доз антигена с интервалами в 4—5 дней (С. Л. Хайт, А. С. Виноградова, 1944; Ю. К. Петров, 1959; 3. Г. Пейсель, С. И. Овсянкин 1960), реже с промежутками в 6—7 дней (М. Г. Гайдамака с соавт., 1960). Вместе с тем есть указания (Л. И. Калинина, 1957), что увеличение интервалов между инъекциями до 16—38 дней сопровождается более интенсивным нарастанием антител.
Кровопускания осуществляются обычно на 7—8-й день после последней инъекции антигена (Ю. К. Петров, 1959; И. Е. Алатырцева с соавт., 1965). Значительно способствует повышению иммунологической реактивности продуцентов предварительное грундирование вирусом гриппа. По данным Ю. К. Петрова (1968), около 80% грундированных лошадей через 35—40 дней с момента начала гипериммунизации дали сыворотку с титром антител в РТГА от 1:400 до 1:2560.
Противогриппозная сыворотка в производственных условиях готовится по регламенту, разработанному сотрудниками Ленинградского НИИВС и отдела вирусологии институт Экспериментальной медицины АМН СССР. С этой цель лошадей иммунизируют антигеном, содержащим штаммы в руса типа Аг и В, внутривенно-капельным методом. Антиге вводится возрастающими дозами с интервалом в 2—4 дш Первые инъекции осуществляются нативной аллантоисно жидкостью или диализованным вирусом с последующи переходом на концентрированный антиген. Титр антител дол жен быть к вирусу А2 не ниже 1:400, а к В — 1:800.
Предпринимаются попытки, направленные на получени специфического лечебного препарата из сыворотки молок; л актирующих коров (Т. И. Крюченкова с соавт., 1966 В. М. Петришва, 1968) с целью замены белка сыворотки лошади. Коровам через сосковый канал молочной железь вводится свежеприготовленная вируссодержащая аллантоис ная жидкость с инфекционным титром 6,0—7,0 log. Така иммунизация позволяет повысить содержание антител в лакт сыворотке до уровня 1:100 — 1:200.
Хороший эффект наблюдается при использовании комбинации применения антигена внутривенно, подкожно и в сосок молочной железы.
Первые опыты по получению очищенной и концентрированной противогриппозной сыворотки были предприняты P. Laidlaw с соавт. (1935), которым при помощи высаливание белков сернокислым натрием удалось сконцентрировать иммунные белки в 8—12 раз. Впоследствии Hare (1939), используя методы высаливания сернокислым аммонием и сернокислым натрием, а также спиртовый, изготовил концентрированную сыворотку. А. В. Бейлинсон с соавт. (1960) провела очистку и концентрацию поливалентной противогриппозной сыворотки методом фракционного высаливания и показали, что антитела представляют глобулин, выпадающий в осадок при концентрации сернокислого аммония в сыворотке 34—38%. Насыщение сернокислым аммонием до концентрации 30% позволяет получать гомогенный гамма-глобулин, не содержащий антител. Добавление от 30 до 38% сернокислого аммония приводит к концентрации сыворотки в 4 раза, а выход антител доходит до 80% (Г. X. Шайхет, 1955; Г. X. Шайхет с соавт., 1959).
Интересные наблюдения опубликовали Ю. К. Петров и А. А. Шарашкина (1960). Проводя сравнительные опыты по получению очищенной сыворотки методами водного диализа, электродиализа и Диаферм-3 (табл. 15), авторы приходят к выводу, что лучшим методом получения препарата является высаливание всех глобулинов сернокислым аммонием с последующим разделением их на эвглобулины водным диализом. Метод ферментативного гидролиза оказался непригодным.
С успехом применяется для очистки противогриппозной сыворотки метод осаждения спиртом на холод (Н. А. Пономарева с соавт., 1956; М. Г. Гайдамака с соавт., 1958).
В настоящее время противогриппозная сыворотка выпускается как в нативном виде, так и очищенной от балластных белков методом осаждения спиртом на холоду. В реакции биологической нейтрализации на куриных эмбрионах сыворотка в разведении 1:150 должна нейтрализовать не менее 100 000 ИД50 вируса гриппа типа Аг и не менее 10 000 ИД50 вируса гриппа типа В, а в РТГА не ниже 1:800 штамм вируса типа В и 1:400 типа А2. Сыворотку лиофилизируют и выпускают в смеси с сульфаниламидами. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|