|
Метод фракционирования при получении осповакцины
Противооспенный гамма-глобулин был получен в 1955 г. С. С. Маренниковой с соавт. из сывороток кроликов и свиней, гипериммунизированных вирусом вакцины. Гамма-глобулиновая фракция выделялась методом спиртового осаждения на холоду по варианту Б. Во всех сериях препарата отмечалась концентрация специфических антител. Так в гамма-глобулине, полученном из сыворотки кролика, концентрация антигемагглютининов достигала в среднем 6,2 раза, а нейтрализующих антител — 6,4 раза. В то же время в гамма-глобулине, выделенном из сыворотки свиней, титр вируснейтрализующих антител в 32 раза превышал титр исходной сыворотки. Позже С. С. Маренникова и 3. И. Огородникова (1960) сообщили об успешном выделении гамма-глобулина из иммунной сыворотки телят и овец. Оказалось, что количество антигемагглютининов концентрировалось в 4—16 раз, а нейтрализующих антител — в 5 раз и при определении на эмбрионах кур последние выявлялись в титре 1:20000 — 1:2000000, а в культуре ткани методом бляшек со 100 цитопатическими дозами вируса — 1:100000. Титр антигемагглютининов был 1:1280—1:20480 (С. С. Маренникова с соавт., 1964).
В настоящее время указанный метод фракционирования является основным при изготовлении данного вида препарата и нашел свое отражение в технологическом регламенте на получение противооспенного гамма-глобулина, утвержденного СВК в июле 1966 г. (А. Т. Кравченко с соавт., 1966). Препарат можно готовить и методом электродекантации (А. А. Воробьев с соавт,, 1966). Выделение гамма-глобулина осуществляется в специальном аппарате — электродекантаторе. Концентрирование растворов гамма-глобулина после электродекантатора производят методом ультрафильтрации в модификации Московского НИИВС им. И. И. Мечникова. Раствор гамма-глобулина концентрируют до 7—10%.
В последние годы в Томском институте вакцин и сывороток И. Н. Федотовой с соавт. (1967) проведены успешные исследования по изысканию наиболее эффективного метода фракционирования белков сыворотки, содержащей специфические антитела против вируса вакцины.
Сравнительному изучению были подвергнуты 4 метода: спиртовый (осаждение на холоду), риваноловый, риванол-спиртовый и спиртоферм. Активность препаратов изучалась в РТГА и реакции биологической нейтрализации на эмбрионах кур.
Оказалось, что в гамма-глобулине, полученном указанными методами достигалась концентрация антигемагглютинирующих антител в 2—16 раз, причем большая степень ее наблюдалась в препарате, изготовленном риванол-спиртовым методом. Что касается концентрации вируснейтрализующих антител, то более закономерно этот процесс имел место при изготовлении гамма-глобулина, полученного методами спиртовым на холоду и риванол-спиртовым.
Вскоре эти наблюдения были расширены (М. А. Мастеница с соавт., 1970). Из сыворотки животных, полученной в процессе гипериммунизации, было сконцентрировано спиртовым методом 5 серий гамма-глобулина. Изучение основных качественных свойств его показало, что на 1 л препарата используется от 7 до 8,5 л сыворотки, а содержание белка в растворе гамма-глобулина составляло от 7,86 до 9,46%.
Процесс концентрации смеси нативной гипериммунной сыворотки привел к увеличению тормозящих гемагглютинацию (от 3,9 до 6 раз) и вируснейтрализующих (2,8—11,9 раза) антител. Так, если средний титр первых в смеси нативной гипериммунной сыворотки колебался от 1:293 до 1:480, а вторых — от 1:5120 до 1:5973, то в готовом препарате гамма-глобулина он был соответственно 1:1333—1:1920 и 1:17066 — 1:61420.
По утвержденному СВК регламенту противооспенный гамма-глобулин должен быть прозрачным или слегка опале- сцировать, стерильным, безвредным, апирогенным и иметь титр вируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации на кроликах не ниже 1:1024, а в реакции нейтрализации на хорионаллантоисных оболочках 12-дневных куриных эмбрионов — не ниже 1:4000. Применение консерванта не допускается. Гамманглобулиновая фракция должна составлять не ниже 97% от общего белка. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|