Исследования в области особоопасных инфекций

Метод фракционирования при получении осповакцины

Противооспенный гамма-глобулин был получен в 1955 г. С. С. Маренниковой с соавт. из сывороток кроликов и свиней, гипериммунизированных вирусом вакцины. Гамма-глобулиновая фракция выделялась методом спиртового осаждения на холоду по варианту Б. Во всех сериях препарата отмечалась концентрация специфических антител. Так в гамма-глобулине, полученном из сыворотки кролика, концентрация антигемагглютининов достигала в среднем 6,2 раза, а нейтрализующих антител — 6,4 раза. В то же время в гамма-глобулине, выделенном из сыворотки свиней, титр вируснейтрализующих антител в 32 раза превышал титр исходной сыворотки. Позже С. С. Маренникова и 3. И. Огородникова (1960) сообщили об успешном выделении гамма-глобулина из иммунной сыворотки телят и овец. Оказалось, что количество антигемагглютининов концентрировалось в 4—16 раз, а нейтрализующих антител — в 5 раз и при определении на эмбрионах кур последние выявлялись в титре 1:20000 — 1:2000000, а в культуре ткани методом бляшек со 100 цитопатическими дозами вируса — 1:100000. Титр антигемагглютининов был 1:1280—1:20480 (С. С. Маренникова с соавт., 1964).

В настоящее время указанный метод фракционирования является основным при изготовлении данного вида препарата и нашел свое отражение в технологическом регламенте на получение противооспенного гамма-глобулина, утвержденного СВК в июле 1966 г. (А. Т. Кравченко с соавт., 1966). Препарат можно готовить и методом электродекантации (А. А. Воробьев с соавт,, 1966). Выделение гамма-глобулина осуществляется в специальном аппарате — электродекантаторе. Концентрирование растворов гамма-глобулина после электродекантатора производят методом ультрафильтрации в модификации Московского НИИВС им. И. И. Мечникова. Раствор гамма-глобулина концентрируют до 7—10%.

В последние годы в Томском институте вакцин и сывороток И. Н. Федотовой с соавт. (1967) проведены успешные исследования по изысканию наиболее эффективного метода фракционирования белков сыворотки, содержащей специфические антитела против вируса вакцины.

Сравнительному изучению были подвергнуты 4 метода: спиртовый (осаждение на холоду), риваноловый, риванол-спиртовый и спиртоферм. Активность препаратов изучалась в РТГА и реакции биологической нейтрализации на эмбрионах кур.

Оказалось, что в гамма-глобулине, полученном указанными методами достигалась концентрация антигемагглютинирующих антител в 2—16 раз, причем большая степень ее наблюдалась в препарате, изготовленном риванол-спиртовым методом. Что касается концентрации вируснейтрализующих антител, то более закономерно этот процесс имел место при изготовлении гамма-глобулина, полученного методами спиртовым на холоду и риванол-спиртовым.

Вскоре эти наблюдения были расширены (М. А. Мастеница с соавт., 1970). Из сыворотки животных, полученной в процессе гипериммунизации, было сконцентрировано спиртовым методом 5 серий гамма-глобулина. Изучение основных качественных свойств его показало, что на 1 л препарата используется от 7 до 8,5 л сыворотки, а содержание белка в растворе гамма-глобулина составляло от 7,86 до 9,46%.

Процесс концентрации смеси нативной гипериммунной сыворотки привел к увеличению тормозящих гемагглютинацию (от 3,9 до 6 раз) и вируснейтрализующих (2,8—11,9 раза) антител. Так, если средний титр первых в смеси нативной гипериммунной сыворотки колебался от 1:293 до 1:480, а вторых — от 1:5120 до 1:5973, то в готовом препарате гамма-глобулина он был соответственно 1:1333—1:1920 и 1:17066 — 1:61420.

По утвержденному СВК регламенту противооспенный гамма-глобулин должен быть прозрачным или слегка опале- сцировать, стерильным, безвредным, апирогенным и иметь титр вируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации на кроликах не ниже 1:1024, а в реакции нейтрализации на хорионаллантоисных оболочках 12-дневных куриных эмбрионов — не ниже 1:4000. Применение консерванта не допускается. Гамманглобулиновая фракция должна составлять не ниже 97% от общего белка.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202