|
Добавление сахаров при получении токсинов Cl. botulinum
Большое значение в получении токсинов придается углеводам. В одних случаях добавление углеводов к среде увеличивает токсинообразование, но не влияет на интенсивность роста микробов, как отмечает И. Упикап (1962, 1963), для типа А, в других — добавление сахаров обеспечивает не только токсинообразование, но и размножение возбудителя, как указывает Е. В. Перова (1970), для типа F.
Обладая широким диапазоном сахаролитической активности, Cl. botulinum типов А и В ферментируют глюкозу, левулезу, фруктозу, мальтозу, декстрин, салицин, глицерин адонит и иррозит. Некоторые штаммы типа В салицин не ферментируют (К. И. Матвеев, 1959). F. Wagner с соавт (1923), К. Levis, Е. Hill (1947) показали, что токсинообразование Cl. botulinum типов А и В при добавлении к среде глюкозы усиливается. Г. Е. Синельников и Л. Г. Щипкова (1974) изучили действие сахаров на токсинообразование Cl. botulinum типа А. Из исследуемых сахаров и их сочетаний (15 вариантов) наилучшее токсинообразование было от 1% глюкозы, 1% мальтозы, а также их совместного добавления и от их сочетания с 0,6% крахмала.
При культивировании Cl. botulinum Е добавляют в бульон 0,5% глюкозы (A. Barron, G. Reed, 1954; А. А. Воробьев с соавт., 1962; М. И. Тарков, 1963; Л. Г. Иванова, Т. И. Сергеева, 1963; Е. Райчева и Н. Марчев, 1966 и др.). Эффект от действия ее в 1%-ной концентрации, по данным Ё. Д. Кушнир (1952), зависит от pH среды: при pH, близкой к нейтральной, она стимулирует токсинообразование Cl. botulinum типа Е, при кислой реакции — тормозит. Cl. botulinum ти па Е способен ферментировать не только глюкозу. Он обладает мощными сахаролитическими свойствами и разлагает с образованием газа декстрозу, левулезу, сахарозу, мальтозу, адонит, сорбит, инозит, глицерин, салицин, декстрин (Е. Наzen, 1937, 1942; Т. А. Завадовская, 1940; С. Dolman, D. Кеег, 1947).
Е. Н. Воробьева (1969), Г. С. Атаманова и Е. Н. Воробьева (1969), Ю. А. Шаронов и Р. А. Афанасьева (1969) и др. использовали в производстве ботулинического токсина типа Е сочетание 0,5% глюкозы и 0,5% мальтозы.
По данным В. И. Чернявского (1970), О. И. Зимина, С. Я. Исаева, В. И. Чернявского (1972), лучшее токсинообразование Cl. botulinum типа Е наблюдается при добавлении к питательной среде 3% декстрина, приготовленного по методу кислотного гидролизата крахмала.
Из 15 различных сочетаний углеводов, вводимых в бульон Мартена, лучшее токсинообразование Cl. botulinum типа Е было при добавлении 0,5% глюкозы с 0,6% крахмала (С. А. Соловьева, 1973).
На интенсивность токсинообразования в какой-то мере оказывает влияние количество посевного материала (D. Ohye, W. Scott, 1953).
В практике получения ботулинических токсинов многие авторы использовали различный процент посевного материала. Так, К. Levies, Е. Hill (1947) для получения ботулинического токсина типа А проводили посев 2%-ной взвесью свежей культуры. Они отметили, что небольшое количество материала и слабое помешивание задерживали образование токсина.
Н. Марчев (1967) использовал 0,5% посевной освеженной культуры Cl. botulinum типа Е. Такое же количество ее для этого типа применяли Л. Г. Иванова и Т. И. Сергеева (1964).
B. Gullmar, N. Molin (1967) указывают, что количество посевного материала на синтетическую среду следует брать в 10 раз. больше, чем на мясную. В. И. Чернявский (1972) полусинтетические среды засевал 0,4—0,5% Cl. botulinum типа Е.
Однако в Томском институте вакцин и сывороток C. А. Соловьевой, Г. Е. Синельниковым, С. А. Нестеровой, С. М. Прегер, Т. В. Майоровой, Г. Н. Майоровой (1972), Г. Е. Синельниковым (1972) было показано, что количество посевного материала в пределах от 0,1 до 5% к объему среды не влияет на интенсивность токсинообразования.
Определенное значение в получении токсинов имеет метод культивирования. При росте возбудителя ботулизма различных типов в целлофановых мешках, помещенных в питательную среду, наблюдается значительное увеличение активности токсина. Приготовленные таким образом токсины отличаются не только высокой концентрацией, но и значительной степенью очистки (A. Poison, М. Sterne, 1946; М. Sterne, L. Wentzel, 1950; Ю. 3. Гендон, 1957; A. Barron, G. Reed, 1954; Н. Meisel с соавт., 1964; А. А. Омарова, 1968; С. А. Соловьева, 1973). Вместе с тем следует указать, что в качестве антигена для гипериммунизации лошадей такие токсины пока не нашли применения. 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
|