Исследования в области особоопасных инфекций

Метод фракционирования Кона

Гамма-глобулин против клещевого энцефалита представляет собой 10%-ный (±1%) раствор гамма-глобулина, изготовленного из иммунной сыворотки лошадей. А. Т. Кравченко с соавт. (1966) исследовали возможность использования для получения гамма-глобулина спиртового, риванолового и солевого методов и пришли к убеждению, что наилучшим способом фракционирования является метод Кона. Как указывают сотрудники Томского института вакцин и сывороток Н. Б. Плахова и А. И. Деева (1965), оптимальными условиями для выделения однородной фракции гамма-глобулина и большего его выхода следует считать положение, когда конечное значение pH после осаждения равно 6,4 (±0,2), а наилучшим условием для растворения гамма-глобулина из смеси глобулинов (II осаждение) является растворение в трех объемах физиологического раствора и 1,5 объемах (взятых в отношении к последнему) дистиллированной воды. Осаждение гамма-глобулина (III осаждение) следует осуществлять при pH 7,0. В последние годы в этом же институте.

Н.Г. Турлянцева провела серию исследований по изысканию наиболее эффективного метода фракционирования белков сыворотки, содержащей специфические антитела против вируса клещевого энцефалита. Сравнительному изучению были подвергнуты 4 метода: спиртовый (осаждение на холоду), модифицированный риваноловый, риванол-спиртовый и спиртоферм. Основанием для выбора данных методов послужили отдельные положительные моменты их технологии, связанные у одних (модифицированный риваноловый и риванол-спиртовый) с сокращением длительности производственного процесса и исключением полностью или частично отрицательных температурных условий при фракционировании и в то же время обеспечивающие более полное извлечение гамма-глобулина, у других (спиртоферм) — с использованием ферментативного гидролиза белка в сочетании со спиртовым методом осаждения на холоду, который способствует снижению анафилактогенных свойств препарата.

Сравнительная характеристика указанных методов показала, что из числа испытанных наиболее эффективным оказался риванол-спиртовый способ осаждения белков как по показателям выхода активного препарата, так и по степени его очистки. Из 1 л нативной сыворотки этим методом получено 54,0±3 дозы, или 162,9 мл гамма-глобулина, в то время как спиртовый и модифицированный риваноловый методы позволили извлечь из нативной сыворотки лошади соответственно 36,0±5 доз, или 108 мл и 33,6±13 дозы, или 100,8 мл препарата из такого же количества сыворотки.

Незначительный выход гамма-глобулина получен при применении метода спиртоферм (26,0±16 доз, или 78 мл). Важно отметить и то, что препарат, изготовленный данными методами, отличался степенью очистки по примеси бета-фракции. Гамма-глобулин, выделенный риванол-спиртовым методом, в то же время был электрофоретически однородным. Остальные методы осаждения не обеспечивали получения однородного гамма-глобулина. Во всех сериях препарата имелась примесь бета-фракции, которая составляла для гамма-глобулина, изготовленного спиртовым методом, в среднем 17,3%, модифицированным риваноловым — 21,3% и спиртофермом — 25,3%.

Эти данные позволили автору внести соответствующие дополнения в существующий технологический регламент и МРТУ-42, предусматривающие возможность получения тамма-глобулина против клещевого энцефалита риванол-спиртовым методом. Противоэнцефалитный гамма-глобулин не должен иметь следов альбумина, а содержание в готовом препарате остаточного спирта не должно превышать 4,5%. Препарат должен быть стерильным, бесцветным, прозрачным или слегка опалесцирующим, безвредным, апирогенным. Иметь индекс нейтрализации в опытах на белых мышах не ниже 10000 (показатель отрицательного логарифма 50%-ной летальности белых мышей в опыте не выше 3,2, при контроле не ниже 7,2), либо 1:320—1:640 по ЦПД50 (на клетках ПЭС) по нейтрализации 100—1000 ТЦД50 вируса. Титр антигемагглютининов должен быть не ниже 1:1280.

1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39  40  41  42  43  44  45  46  47  48  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  88  89  90  91  92  93  94  95  96  97  98  99  100  101  102  103  104  105  106  107  108  109  110  111  112  113  114  115  116  117  118  119  120  121  122  123  124  125  126  127  128  129  130  131  132  133  134  135  136  137  138  139  140  141  142  143  144  145  146  147  148  149  150  151  152  153  154  155  156  157  158  159  160  161  162  163  164  165  166  167  168  169  170  171  172  173  174  175  176  177  178  179  180  181  182  183  184  185  186  187  188  189  190  191  192  193  194  195  196  197  198  199  200  201  202