Исследования в области особоопасных инфекций

Методика выделения культур чумного микроба

Методика выделения культур чумного микроба была обычная, принятая всеми противочумными учреждениями. Внутренние органы грызунов (печень и селезенка) без видимых патологоанатомических изменений засевались на агаровую пластинку. Для заражения биопробных животных брали суспензию паренхиматозных органов и кровь от 10—15 грызунов одного вида. Зверьков с патологоанатомическими изменениями исследовали индивидуально. Питательной средой служил агар Хоттингера, к части серий которого добавляли гемолизированную кровь как стимулятор роста чумного микроба. Для задержки роста посторонней микрофлоры добавляли генцианвиолет в различных разведениях (1:100000 — 1:400 000), в зависимости от его серии. Чашки с посевами инкубировали в термостате при 27—28°. Подозрительные колонии на P. pestis отсевали и ставили пробу на специфичность с чумным и псевдотуберкулезным бактериофагами.

Исследование эктопаразитов проводили только бактериологически. В один посев, как правило, брали не более чем по 50 блох одного вида. В некоторых случаях (блохи на индекс, для вычисления процента зараженных) исследовали по 10 и даже менее блох. Блох исследовали или в сухом виде, или с промывкой стерильным физиологическим раствором. На сегмент агара наносили суспензию в количестве 2—3 капель. На одну чашку с агаром Хоттингера засевали шесть суспензий. У части выделенных культур изучали культурально-морфологические, ферментативные и вирулентные свойства.

Как уже было сказано выше, все культуры, выделенные со смежной с оздоравливаемой территории, были типичны для R варианта чумного микроба и в большинстве обладали высокой вирулентностью. В морфологическом отношении небольшие отклонения от типичного варианта отмечены у 4 культур, выделенных в 1962 г. (окрестности Камышлыбаш, г. Аральска).

Нативные взрослые колонии этих культур были гладкие, желтого цвета и без кружевной зоны. Однако штаммы оказались высоковирулентными, а в биохимическом отношении также типичными для R варианта. В последующие годы на этой территории выделялись штаммы, принадлежащие к R варианту. Особых отклонений как в морфологии, так и в биохимии не отмечено.

В 1963 г. в 52 км от Аральска (урочище Кульдунган) от большой песчанки выделена культура, которая не лизировалась специфическими бактериофагами и при пересевах диссоциировала на R и S варианты с коричневым пигментом. Лизабильность специфическими бактериофагами появилась только после проведения этих субкультур через организм белых мышей. Вирулентность этих штаммов не была снижена. Существенные отклонения в отношении морфологии колоний и некоторых биохимических свойств в большинстве случаев отмечались у штаммов из центральной части Приаральских Каракумов, где проводились оздоровительные мероприятия. На этой территории постоянно регистрировались интенсивные эпизоотии чумы. Различные промежуточные формы чумного микроба, встречающиеся на этой территории, крайне разнообразны по своей морфологии и некоторым биохимическим свойствам. Характерными морфологическими признаками переходных OS и OR форм являются следующие:

1. Мелкие сероватые колонии со слабо выраженной зернистостью и без периферической кружевной зоны.

2. Колонии более прозрачные, ахромогенные, с голубоватым оттенком в проходящем свете, кружевная зона выражена слабо.

3. Колонии темно-коричневые, с гладким вдавленным центром, и валикообразно приподнятыми краями. Периферическая «кружевная» зона отсутствует.

4. Колонии крупные, зернистые, плоские, темноокрашенные, с бухтообразно изрезанными краями.

5. Мелкие, гладкие, почти черные колонии со слабой опалесценцией на месте предполагаемой «кружевной» зоны.

6. Колонии с выраженным феноменом Гамалеи—Творта, говорящем о спонтанном поражении бактериофагом.

7. Сильно пигментированные колонии, окрашивающие питательные среды в цвет пива.

В биохимическом отношении все описанные варианты ферментировали до кислоты глюкозу, мальтозу, маннит в течение 3—4 суток, не оказывая влияния на рамнозу, сахарозу и лактозу.

Некоторые диссоциированные штаммы разлагали глицерин медленнее, чем обычно: на 15—20-е сутки (срок наблюдения). Несколько штаммов давали отрицательные результаты реакций нитрификации и денитрификации.

При изучении вирулентности этих культур оказалось, что штаммы, принадлежащие по типу внешнего строения взрослых колоний к вариантам 1, 5, 6 были с ослабленной вирулентностью. Лабораторные животные от заражающей дозы 1 млн. микробных клеток гибли на 8—9-е сутки.

~1~  ~2~  ~3~  ~4~  ~5~  ~6~  ~7~  ~8~  ~9~  ~10~  ~11~  ~12~  ~13~  ~14~  ~15~  ~16~  ~17~  ~18~  ~19~  ~20~  ~21~  ~22~  ~23~  ~24~  ~25~  ~26~  ~27~  ~28~  ~29~  ~30~  ~31~  ~32~  ~33~  ~34~  ~35~  ~36~  ~37~  ~38~  ~39~  ~40~  ~41~  ~42~  ~43~  ~44~  ~45~  ~46~  ~47~  ~48~  ~49~  ~50~  ~51~  ~52~  ~53~  ~54~  ~55~  ~56~  ~57~  ~58~  ~59~  ~60~  ~61~  ~62~  ~63~  ~64~  ~65~  ~66~  ~67~  ~68~  ~69~  ~70~  ~71~