Исследования в области особоопасных инфекций

Физиологические особенности и условия культивирования

С. diphtheriae продуцируют во внешнюю среду значительное количество различных белков и ферментов. Важнейшие из них — специфический дифтерийный токсин, продукция которого служит основным таксономическим признаком С. diphtheriae, а также ферменты, расщепляющие поли-, ди- и моносахариды, многоатомные спирты (крахмал, гликоген, мальтоза, глюкоза и др.), внеклеточные дезоксирибонуклеазы, каталаза, особый вид сукцинатдегидрогеназы, цистиназа, нейраминидаза, нитратазы и др.

Первое упоминание о внеклеточной ДНК-азе дифтерийных бактерий можно найти в работе Pope (1957), который в очищенном (3200Lf на 1 мг белка) препарате токсина С. diphtheriae обнаружил примесь ДНК-азы. Эти два белка удалось разделить методом электрофореза и ионообменной хроматографии. ДНК-аза дифтерийных бактерий представляет собой термостабильный недиализуемый белок. Мы проверили на наличие внеклеточной ДНК-азы 194 штамма различных корине-бактерий. В их число входила группа из 126 токсигенных и нетоксигенных штаммов, относимых к С. diphtheriae var. gravis. Среди них было 28 токсигенных штаммов С. diphtheriae лизирующихся различными сочетаниями фагов О, Р, Q, R, S, Т (по схеме М. Д. Крыловой и С. С. Маркиной, 1972), 52 нетоксигенных конвертируемых фагами tox+ штамма варианта gravis (фаговарианты (по схеме М. Д. Крыловой, 1970) ABCDFGH, ABCDFG, ABCDFG, ABCDF, ACDf, AbD, CDf, AF, A), 26 их стабильных токсигенных конвертантов, 5 конвер- тантов, утративших токсигенность при хранении, а также нетоксигенные штаммы фаговариантов, I, К, Н и штаммы основных серовариантов схемы В. С. Сусловой (1964). Все эти 126 штаммов образовывали внеклеточнуюную ДНК-азу.

Этот фермент продуцировали также 3 имевшихся в нашем распоряжении токсигенных и нетоксигенных штамма С. diphtheriae var. intermedius, 39 штаммов токсигенных и нетоксигенных коринебактерий, относимых к С. diphtheriae var. mitis, в том числе штамм PW-8, эталонные штаммы 23ВС и 3463, полученные от Barksdale нетоксигенные штаммы С7 и его конвертанты, превращенные в токсигенные при инфицировании фагами tox+ β, L, α, δ, а также штаммы С. belfanti и С. ulcerans. Arden и Barksdale (1970) также нашли, что нетоксигенный штамм С7 образовывал внеклеточную ДНК-азу так же хорошо, как и его токсигенный конвертант С7 (β) tox+.

Внеклеточная ДНК-аза не обнаружена только у 2 имевшихся в нашем распоряжении нетоксигенных штаммов G. pseudotuberculosis (ovis), у 8 штаммов С. hofmannii и у 6 из 8 нетоксигенных, не сбраживающих глюкозу коринебактерий, морфологически сходных с С. hofmannii. Образование коринебактбриями внеклеточных ДНК-аз оказалось не связанным с токсигенностью.

Образование цистиназы дифференциально-диагностический признак, широко используемый в практике для дифференциации С. diphtheriae от «дифтероидов». В литературе нет указаний на выделение фермента цистиназы, однако известно, что в присутствии тиосульфата С. diphtheriae разлагают цистин или цистеин с отщеплением сероводорода. Если сероводород отщепляется в присутствии К2ТеО3 (на теллуритовых средах), то вокруг колоний формируется коричневый ореол (Tinsdalе, 1947).

Barksdale (1970) даже считает способность к продукции цистиназы ценным генетическим маркером вида С. diphtheriae. Однако его наблюдения касаются только пары генетически связанных штаммов варианта, mitis — нетоксигенного С7 и его конвертанта C7s (β) tox+. Warm и Spearing (1963) нашли нейраминидазу во всех исследованных ими образцах нативного токсина и в пятикратно кристаллизированном токсине. Токсин чрезвычайно трудно, лишить нейраминидазной активности. Фракции с чистым токсином, пропущенным через сефадекс, могли не иметь нейраминидазной активности, но фракции, имеющие нейраминидазную активность всегда содержали токсин.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56