Исследования в области особоопасных инфекций

Токсигенность в конвертируемой смеси

В исследованиях Nestoresco, Calalb и соавт. (1966) конверсия фагом 23В нетоксигенного штамма варианта intermedius в токсигенный происходила уже через 15 мин контакта фага и клеток, что определи л и на основании цитотоксического действия конвертированных бактерий на культуру тканей почек макак резус. Оказалось, что конверсия есть функция множественности инфекции: при разведении фага 1:100 конверсия наступала после 15 мин контакта, при 1:300 — после 45 мин, при 1:500 — только после 3,5 ч. Раннюю конверсию обнаруживали, только применяя метод культуры тканей. Токсигенность в конвертируемой смеси на морских свинках можно было обнаружить только после 2 ч контакта, с помощью реакции преципитации в геле — только после 2,5 ч.

Возможность селекции вирусами предсуществующих в культуре токсигенных мутантов была опровергнута также в опытах Hewitt (1954): конверсия совершалась даже в тех пробирках, где на 500 бактерий приходилось всего 50 частиц бактериофага. В случае селекции на 50 клеток должен был приходиться хотя бы один токсигенный мутант, а значит, 1/50 клеток нетоксигенной культуры должны быть токсигенны, что обязательно сообщило бы исходной культуре некоторую степень токсигенности, а этого не наблюдали.

Наконец, для конверсии не обязателен видимый лизис в месте нанесения вируса (М. Д. Крылова, М. А. Мнушкина, 1973; Hewitt, 1954, и Др.), что также свидетельствовало против предположения о селекции токсигенных мутантов.

Феномен лизогенной конверсии был дифференцирован также от трансформации — передачи признаков чистой бактериальной ДНК: бактериофаг, очищенный от бактериальных продуктов (в том числе ДНК) фильтрацией через коллоидные мембраны с размером пор 0,07 мкм, успешно конвертировал нетоксигенные штаммы (Hewitt, 1954). Фильтрат был абсолютно неактивен.

Феномен лизогенной конверсии дифференцирован также от трансдукции. Трансдуцирующие фаги, как правило, дефектны и получают кусок бактериальной хромосомы в процессе рекомбинации, в обмен на свои гены. У конвертирующих фагов β tox+ дефектности не обнаружено. При трансдукции фаг служит переносчиком генов от одной бактерии к другой, в связи с чем решающее значение имеет генотип бактерии-донора.

Генотип бактерии не влияет на конвертирующую активность вируса: после многократных пассажей на нетоксигенных штаммах конвертирующие фаги не утрачивали своей активности. Как известно, трнсдуцирующей активностью обладает не более 1 на 105 — 106 частиц фага, вследствие чего трансдуктанты возникают также с малой частотой. В опытах Groman (1953), Hewitt (1954), Л. С. Наумова (1967), М. В. Чистяковой (1971, 1972) почти все клетки нетоксигенной культуры превращались в токсигенные, что свидетельствовало против трансдукции.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56