|
Реадсорбция фага на мертвых и резистентных к нему бактериях
Одной из причин низкого титра получаемых бактериофагов может быть также реадсорбция фага на мертвых и резистентных к нему бактериях. На некоторых фагоустойчивых культурах коринефаги могут адсорбироваться также хорошо (от 40 до 77,2%), как на индикаторных культурах (И. М. Габрилович, 1964). Число клеток в фаголизате может быть чрезвычайно велико, особенно при лизисе культуры умеренными фагами. Флаконы с такими фаголизатами очень скоро становятся мутными от вторичного роста. Для предотвращения реадсорбции фага к среде добавляют твин-80 (М. Д. Крылова, 1970; Groban, Bobb, 1955) или 0,7 М раствор цитрата натрия до конечной концентрации в среде 0,07 М (Saragea, Maximesco, 1964), для защиты фага от поверхностной денатурации 0,1 % очищенного желатина (Barksdale и Pappenheimer, 1954). Отсутствие в среде ионов кальция препятствует формированию бляшек фагов В и β tox+, в связи с чем для получения четких и постоянных бляшек рекомендуют добавлять к твердым средам СаС1*2Н20 до конечной концентрации 0,001 М (Groman, Lockart, 1953).
В различных странах выделено значительное число конвертирующих фагов, содержащих ген tox+. Их обнаруживают в токсигенных культурах на различных индикаторных Штаммах и обозначают как фаги tox+.
Некоторые из фагов tox+ серологически родственны между собой. Так, фаги tox, выделенные из штаммов вариантов mitis (35 к и 51 к) и gravis (253 к) на одном и том же индикаторном штамме gravis 159, были идентичны серологически и вызывали перекрестный профаговый иммунитет при инфицировании индикаторного штамма, что также являлось доказательством их родства между собой (И. В. Чистякова, 1971 ,1972).
В связи с этим было естественно предположить, что конвертирующие фаги, имеющие ген tox+, должны выявляться на родственных индикаторных штаммах и, следовательно, при наличии их в любой токсигенной культуре можно обнаружить конвертирующий фаг. Вместе с тем это далеко не всегда удается. Например, Groman и Memmer (1958), используя один индикаторный штамм, обнаружили фаги tox+ только у 46% из 56 токсигенных штаммов варианта mitis. На присутствие фагов tox+ проверено 20 штаммов 12 маркируемых фагами О, Р, Q, R, S, Т, G фаговариантов - OPQRSTG, OPQRTG, OPQT, OPTG и других (М. Д. Крылова, М. А. Мнушкина, 1973). Фаговариант G (g) был представлен тремя его субвариантами: bG, ABg и ABfCH (М. Д. Крылова, 1972). Штаммы этих 13 фаговариантов были выделены в СССР в 1959—1969 гг. в Чите, Челябинске, Москве, Иваново, Тюмени, Рязани, Ярославле, Красноярске, Тамбовской и Московской областях. В качестве индикаторных в этих опытах использовали 20 штаммов 12 фаговариантов схемы фаготипирования М. Д. Крыловой (1970) (ABCDFGH, ABCDfG, ABCDF, ABCDfg, ACD, ABD, A, CDf, AF, H, J, К) нетоксигенных коринебактерий, относимых к С. diphtheriae var gravis, выделенных в 1965.—1969 гг. в 14 городах и селах СССР (М. Д. Крылова, 1970, 1972).
Только в штаммах 4 фаговариантов — ABg, ABfGH, pQrS и bG — удалось обнаружить фаги tox+: ltox+, 2tox+t 3tox+ и 4tox+. Хорошими индикаторами для этих фагов tox+ оказались штаммы вариантов ABCDFGH, ABCDFG, обладающие наиболее широким спектром чувствительности к типовым фагам схемы. На штаммах фаговариантов I, Н и К нам не удалось выделить фагов tox+ У всех 4 фагов tox+ проверяли h-спектр на 14 индикаторных штаммах, в число которых входили штаммы всех 9 конвертируемых фагами tox+ вариантов — ABCDFGH, ABCDFG, ABCDF, ABCDfs, ACD, AbD, AF, CDF, А, сбраживающих крахмал нетоксигенных С. diphtheriae и относимых согласно инструкции к варианту gravis. Оказалось, что фаги ltox+ и 4tox+ имели идентичный спектр хозяев. Фаги 2tox+ и 3tox+ по этому признаку также оказались идентичными между Собой, отличаясь от первой пары вирусов (М. А. Мнушкина, М. Д. Крылова, 1973).
С помощью этих фагов были конвертированы в токсигенные 127 нетоксигенных штаммов указанных 9 фаговариантов. Из всех выборочных конвертантов (71) выделены нативные фаги tox+. Характеристика их h-спектра в значительной степени зависела от лизогенности нетоксигенных предшественников конвертанта. Если они были нелизогенны, то h-спектр выделенных из их конвертантов фагов tox+ полностью совпадал с h-спектром конвертировавшего фага. Однако у части штаммов, нетоксигенные предшественники которых были в наших опытах также нелизогенны, выделяли фаги tox+ с измененным h-спектром. Примечательно, что все без исключения конвертанты варианта ABCDfGH независимо от того, каким фагом tox+ они были инфицированы, выделяли фаги с h-спектром, идентичным спектру фага 1tox+, который был выделен нами из природного токсигенного штамма фаговарианта ABfGH.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
|